川崎病内皮细胞高表达IL-1β促进中性粒细胞活化和分泌Sema4D

摘要

目的 探讨川崎病（KD）冠状动脉内皮细胞（HCAECs）条件培养基对中性粒细胞生物学功能的影响及机制。方法 2022年12月在西安市儿童医院收集KD患儿和健康儿童混合血清，分别刺激HCAECs作为KD组和HC组，RT-PCR检测两组细胞IL-1β表达。HCAECs分为si-IL-1β组和si-NC组，分别转染IL-1β siRNA和无效siRNA,然后加入KD血清刺激，RT-PCR检测HCAECs中IL-1β mRNA表达。收集si-IL-1β组和si-NC组细胞的培养上清液，经离心和滤菌后分别得到两组细胞的条件培养基，ELISA检测两组条件培养基中IL-1β浓度，Transwell实验检测条件培养基对中性粒细胞迁移能力的影响，流式细胞术检测条件培养基对中性粒细胞凋亡和Sema4D表达的影响。中性粒细胞分为TAPI-1预处理+si-NC条件培养基组、DMSO预处理+si-NC条件培养基组、TAPI-1预处理+si-IL-1β条件培养基组和DMSO预处理+si-IL-1β条件培养基组，用si-IL-1β组或si-NC组条件培养基分别刺激已用金属蛋白酶ADAM17的抑制剂TAPI-1或DMSO预处理的中性粒细胞，流式细胞术检测中性粒细胞Sema4D表达。结果 RT-PCR显示，KD组较HC组HCAECs中IL-1β明显高表达（P<0.01）;si-IL-1β组IL-1β mRNA表达较si-NC组明显降低（P<0.01）。与si-NC组比较，si-IL-1β组条件培养基IL-1β含量明显降低（P<0.01）,条件培养基处理的中性粒细胞迁移能力明显下降（P<0.01）,而中性粒细胞凋亡和Sema4D表达均增加（P<0.01）。与DMSO预处理+si-NC条件培养基组比较，TAPI-1预处理+si-NC条件培养基组Sema4D⁺中性粒细胞百分比明显升高（P<0.05）,而TAPI-1预处理+si-IL-1β条件培养基组和DMSO预处理+si-IL-1β条件培养基组中性粒细胞Sema4D无明显差异（P>0.05）。结论 川崎病内皮细胞高表达IL-1β促进中性粒细胞迁移并抑制中性粒细胞凋亡，而且可能通过激活ADAM17促进中性粒细胞分泌Sema4D。

关键词

IL-1β / Sema4D / 川崎病 / 中性粒细胞 / 冠状动脉内皮细胞