沉默lncRNA XIST对阿霉素诱导的扩张型心肌病的影响及其机制

摘要

目的 探究长链非编码RNA X-无活性特异性转录物(lncRNA XIST)对阿霉素诱导的扩张型心肌病(DCM)大鼠心肌纤维化和心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法 采用阿霉素诱导法建立DCM大鼠模型，将DCM大鼠分为模型组、sh-NC组和sh-XIST组，每组10只；另取10只健康SD大鼠设为对照组。采用超声影像系统检测各组大鼠心脏功能指数左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期内径(LVEDD)和左室射血分数(LVEF),采用苏木素伊红染色和Masson三色染色检测大鼠心肌组织病理学变化，TUNEL检测大鼠心肌细胞凋亡水平。采用阿霉素诱导H9c2细胞系构建DCM细胞模型，将DCM细胞分为模型组、sh-NC组、sh-XIST组、sh-XIST+miR-NC组和sh-XIST+miR-149-5p inhibitor组，未经阿霉素处理的H9c2细胞作为对照组。采用双荧光素酶报告试验分析XIST、miR-149-5p和血小板源性生长因子C(PDGFC)的靶向关系。采用流式细胞术检测心肌细胞凋亡水平。采用RT-qPCR检测大鼠心肌组织和H9c2细胞中XIST、miR-149-5p和PDGFC表达水平。采用Western blot检测大鼠心肌组织和H9c2细胞中PDGFC、α-SMA、collagenⅠ和TGF-β1表达水平。结果 (1)与sh-NC组比较，sh-XIST组大鼠心肌组织中XIST水平及PDGFC的mRNA和蛋白水平均降低(P<0.01),LVESD、LVEDD、TUNEL阳性细胞率以及α-SMA、collagenⅠ和TGF-β1蛋白水平均降低(P<0.05),miR-149-5p水平和LVEF水平均升高(P<0.01);心肌细胞坏死和组织纤维化均减少。(2)与sh-NC组比较，sh-XIST组H9c2细胞凋亡率、XIST水平、PDGFC mRNA和蛋白水平以及α-SMA、collagenⅠ和TGF-β1蛋白水平均降低(P<0.05),miR-149-5p表达水平升高(P<0.05)。与sh-XIST+miR-NC组比较，sh-XIST+miR-149-5p inhibitor组H9c2细胞凋亡率、PDGFC mRNA和蛋白水平以及α-SMA、collagenⅠ和TGF-β1蛋白水平均升高(P<0.05),miR-149-5p表达水平降低(P<0.05)。结论 沉默lncRNA XIST通过上调miR-149-5p表达和抑制PDGFC表达，进而抑制阿霉素诱导的DCM大鼠心肌纤维化和心肌细胞凋亡水平，从而改善DCM的发展。

关键词

lncRNA XIST / 扩张型心肌病 / 心肌纤维化 / 细胞凋亡 / 大鼠