Aβ_1-42诱导的阿尔茨海默病细胞模型中神经损伤及凋亡的机制

摘要

目的 使用Aβ_1-42诱导HT22细胞建立阿尔茨海默病（Alzheimer′s disease, AD）细胞模型，并探讨该模型中Aβ导致的神经损伤及细胞凋亡的靶向信号通路。方法 分别使用不同浓度的Aβ_1-42（0,0.625,1.25,2.5,5,10,20,40μmol/L）干预HT22细胞，确定建立AD细胞模型的最适浓度；随后在最适浓度干预后6,12,24,48 h观察细胞形态，检测细胞存活率，确定建立AD细胞模型的最适时间。将细胞分为AD组(20μmol/L Aβ_1-42+PBS)和NC组（PBS）,生长对数期的HT22细胞分别干预24 h,进行后续实验。Western blot检测细胞凋亡指标（cleaved-Caspase-3）、神经营养因子（NRN1）、神经突触指标（SYP、MAP-2）的表达情况；免疫荧光检测MAP-2的表达及分布情况。生物信息学的方法预测AD相关信号通路，并通过Western blot验证ERK信号通路的磷酸化水平。结果 Aβ_1-42诱导HT22细胞建立AD细胞模型的最适浓度为20μmol/L,最适时间为24 h。与NC组相比，AD组cleaved-Caspase-3表达升高（P<0.01）,NRN1表达降低（P<0.000 1）,SYP、MAP-2表达降低（P<0.01）。生物信息学的分析显示，ERK1（MAPK3）与APP和CASP9基因表达呈正相关（r=0.634,P<0.01;r=0.513,P<0.05）。Western blot显示，与NC组相比，AD组ERK磷酸化水平较高（P<0.01）。结论 Aβ_1-42诱导HT22细胞建立的AD细胞模型中，引起神经损伤及细胞凋亡的机制可能通过激活ERK信号通路来实现。

关键词

阿尔茨海默病 / Aβ_1-42 / 细胞凋亡 / ERK / HT22细胞 / 生物信息学