Treg细胞抑制慢性中耳炎模型小鼠中耳炎症的进展

摘要

目的 探究慢性中耳炎（chronic otitis media, COM）小鼠中Treg细胞与炎症发展之间的关系。方法 采用不可分型流感嗜血杆菌（NTHi）腹腔注射和中耳咽鼓管（ET）阻断的方式诱导构建慢性中耳炎小鼠模型（模型组）,选择健康BALB/c小鼠作为对照组。分别在建模后第3,14,28,56天分离收集小鼠中耳积液和中耳黏膜组织，通过苏木精-伊红（HE）染色检测MEM病理变化，采用免疫组织化学染色评估CD4⁺和Foxp3⁺ T细胞水平，ELISA和Western blot分别检测小鼠中耳积液和中耳黏膜组织中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1β、IL-10和转化生长因子（TGF-β）水平，流式细胞术分析CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺细胞比例。另取COM模型小鼠分为PBS组和抗-CD25组。抗-CD25组小鼠腹腔注射抗CD25 mAb模拟体内Treg耗竭，PBS组小鼠腹腔注射等量PBS溶液，第56天收集小鼠中耳积液、中耳黏膜组织、脾脏和颈部淋巴结组织，检测分析脾脏、颈部淋巴结和中耳黏膜组织中CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺细胞比例，中耳黏膜组织中炎性因子水平，以及中耳积液中细菌水平。结果 HE结果显示，对照组小鼠中耳黏膜组织正常，模型组小鼠中耳黏膜组织出现炎性细胞浸润，细菌数量、炎性细胞数量和黏膜厚度均增加（P<0.05）。与对照组比较，模型组小鼠中耳黏膜组织中CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺细胞比例升高（P<0.05）,中耳积液和中耳黏膜组织中炎性因子IL-1β、TNF-α、IL-10和TGF-β的水平均升高（P<0.01）。与PBS组比较，抗-CD25组小鼠中耳黏膜组织、脾脏和颈部淋巴结组织中CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺细胞比例均降低（P<0.05）,中耳积液中细菌数和中耳黏膜组织中炎性因子IL-1β、TNF-α、IL-10和TGF-β的水平均降低（P<0.01）。结论 Treg细胞在慢性中耳炎的炎症平衡维持中具有重要作用，抑制炎症的进展，但过度的Treg细胞抑制了宿主对细菌的清除作用。

关键词

慢性中耳炎 / 不可分型流感嗜血杆菌(NTHi) / Treg细胞 / 中耳积液 / 中耳黏膜组织