脂多糖和肿瘤坏死因子α对人牙髓干细胞增殖和成骨分化的影响

摘要

目的 探讨脂多糖（LPS）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）对人牙髓干细胞（hDPSCs）增殖和分化的影响。方法 体外分离培养hDPSCs,分别用不同浓度LPS（0,0.1,1,10μg/mL）和TNF-α（0,1,10,100 ng/mL）培养细胞。培养24,48,72 h,应用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）检测hDPSCs增殖活性变化；培养7,14,21 d应用茜素红（AR）染色试剂盒和5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸盐（BCIP）/氯化硝基四氮唑蓝（NBT）碱性磷酸酯酶（ALP）显色试剂盒检测hDPSCs肉眼观AR染色变化、钙结节定量、ALP染色和ALP活性等成骨分化指标。结果 （1）CCK-8实验显示1,10,100 ng/mL TNF-α作用于hDPSCs 24,48,72 h后细胞增殖活力降低（P<0.05）。AR成骨诱导染色结果显示培养7,14 d, TNF-α各浓度组肉眼观AR染色无明显差异；培养21 d, 10 ng/mL和100 ng/mL TNF-α组矿化程度相比0 ng/mL组低（P<0.05）。ALP染色和ALP活性试剂盒分析显示诱导培养7,14,21 d后，相比0 ng/mL组，1 ng/mL,10 ng/mL和100 ng/mL TNF-α组ALP染色变浅，且ALP活性降低（P<0.05）。（2）CCK-8实验显示不同浓度LPS作用hDPSCs 24 h和48 h后细胞增殖活性没有明显差异，而1μg/mL和10μg/mL组LPS作用hDPSCs 72 h后OD₄₅₀值大于0μg/mL组（P<0.05）。ALP成骨诱导染色显示培养7,14,21 d,不同浓度LPS作用后ALP染色和ALP活性变化不明显。AR成骨诱导染色显示培养7 d, LPS各浓度组的矿化程度不明显；10μg/mL LPS培养14,21 d矿化程度较0μg/mL低（P<0.05）。结论 LPS对hDPSCs成骨分化的影响取决于LPS浓度和作用时间，高浓度LPS促进hDPSCs增殖。TNF-α抑制hDPSCs的增殖和成骨分化。

关键词

脂多糖 / 肿瘤坏死因子α / 人牙髓干细胞 / 牙髓炎 / 成骨分化