miR-603对宫颈癌SiHa细胞增殖和迁移的影响及其机制

摘要

目的 探讨miR-603抑制宫颈癌细胞增殖和迁移的机制。方法 采用基因编辑系统(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated nuclease 9, CRISPR/Cas9)分别敲除宫颈癌细胞SiHa中人乳头瘤病毒16(human papilloma virus 16, HPV16)E6、E7后采用real-time PCR检测miR-603的表达。将宫颈癌细胞SiHa分为4组：mimic NC组、mimic 603组、inhibitor NC组和inhibitor 603组，将mimic NC、mimic 603、inhibitor NC及inhibitor 603分别转染SiHa细胞，通过real-time PCR检测miR-603的表达水平，CCK-8法检测SiHa细胞增殖能力，Transwell小室法检测SiHa细胞迁移能力。双荧光素酶报告试验检测miR-603是否与IQ结构域GTP酶激活蛋白3(IQ motif-containing GTPase activating protein 3,IQGAP3)直接结合，Western blotting检测IQGAP3蛋白表达。UALCAN(The University of Alabama at Birmingham cancer data analysis portal)数据库分析IQGAP3在肿瘤中的表达情况；通过肿瘤细胞系百科全书(Cancer Cell Line Encyclopedia, CCLE)数据库分析IQGAP3在宫颈癌细胞系中的表达；利用分析癌症基因表达和病毒感染的交互式在线数据库(an interactive online database for analysis of gene expression and viral infection in cancer, OncoDB)分析IQGAP3与宫颈癌患者HPV感染的相关性。结果 敲除HPV16 E6、E7后miR-603的表达升高(P<0.05)。过表达miR-603后，SiHa细胞的增殖和迁移能力下降(P<0.05);敲低miR-603后，SiHa细胞的增殖和迁移能力增强(P<0.05)。双荧光素酶报告试验提示IQGAP3是miR-603的直接靶点，过表达miR-603后，IQGAP3的表达降低，敲低miR-603可促进IQGAP3的表达。UALCAN数据库显示IQGAP3在多种肿瘤组织中表达高于正常对照，OncoDB数据库分析发现HPV16、18阳性患者IQGAP3表达均高于阴性患者。使用CCLE数据库分析IQGAP3在宫颈癌细胞系的表达，发现HPV阴性C33A细胞中IQGAP3表达明显低于HPV16阳性CASKI、SiHa细胞，以及HPV18阳性HELA、C4I、C4II及MS751细胞。结论 敲除HPV16 E6、E7后miR-603表达上调，miR-603可抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖和迁移，这可能与其直接靶向宫颈癌中高表达的IQGAP3有关。

关键词

宫颈癌 / miR-603 / IQGAP3 / 细胞增殖 / 细胞迁移