以CGRP为靶点的单抗药物的电荷变异体表征研究

摘要

目的 对抗降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide, CGRP)单抗及其电荷变异体进行充分表征分析。方法 以抗CGRP单抗为研究对象，利用离子交换色谱对抗CGRP单抗电荷变异体进行分离收集，再利用液质联用技术(LC-MS/MS)从分子量、轻重链亚基以及翻译后修饰等方面对抗CGRP单抗和收集到的组分进行表征。结果 利用离子交换色谱(IEC)仪器收集到抗CGRP单抗的电荷变异体分为主峰、酸性峰组(A1-A3)和碱性峰组(B1-B4)。质谱鉴定的抗CGRP单抗的相对分子质量为147 103(主要糖型A2G1F,A2G0F);糖肽水平上的分析发现，含有N糖基化修饰的肽段序列为“TKPREEQFNSTYR”,糖基化位点为N296。酸碱变异体组分的N糖型修饰中A2G0F(>30%)和A2G1F(>35%)占比最大，并且酸性变异体中均存在唾液酸修饰；在所有组分中均检测到脱酰胺存在，酸性变异体脱酰胺比例较高；重链第109位，抗体骨架区FR区域上的色氨酸残基发生氧化的比例最高，并且酸性变异体发生氧化的比例总体高于碱性变异体；酸性变异体组分发生焦谷氨酸环化的比例远高于碱性变异体组分；抗CGRP单抗的赖氨酸(K)糖化位点比较丰富，轻链K188位点和重链K149、K245位点的糖化比例相对较高。结论 通过表征分析发现，抗CGRP单抗酸性变异体的唾液酸修饰、氧化和焦谷氨酸环化发生比例高于碱性变异体，并且成功鉴定了各修饰发生的位点以及相对丰度。这些信息有助于评估是否需要进一步的药物强制降解研究和制定合理的的药物质量控制方法。

关键词

偏头痛 / 降钙素基因相关肽 / 电荷变异体 / 质谱表征 / 翻译后修饰