茶黄素通过抑制细胞过度自噬减轻新生大鼠缺氧缺血性脑损伤

摘要

目的 基于沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)/叉头盒蛋白O1(FoxO1)信号通路探讨茶黄素(Theaflavins, TFs)在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)中的作用及机制。方法 将7日龄Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为假手术组(sham组)、模型组(HIBD组)、茶黄素组(TFs+HIBD组)、SIRT1抑制剂组(TFs+HIBD+Ex-527组),每组40只。假手术组仅游离右侧颈总动脉，不进行缺血缺氧处理；模型组采用改良Rice-Vannucci法，游离并结扎右侧颈总动脉后缺氧制成HIBD模型；茶黄素组和SIRT1抑制剂组在建立HIBD模型前，给予茶黄素灌胃，SIRT1抑制剂组给予Ex-527侧脑室注射。各组于术后6,12,24,48,72 h对新生大鼠进行Longa评分、一般状态、行为学检测及脑组织称重；苏木素-伊红染色(HE)染色观察脑组织病理学改变；蛋白质印迹法(Western blotting)检测SIRT1、FoxO1、Ac-FoxO1、Beclin1、LC3-Ⅱ/Ⅰ在蛋白质水平的表达。结果 与sham组比较，HIBD组新生大鼠精神不振，神经功能缺损评分显著升高(P<0.05),体质量增长迟缓(P<0.01),翻正反射时间明显延长(P<0.05),右侧脑组织质量增大(P<0.05),HE染色可见大脑皮层区神经元数目减少，SIRT1、FoxO1蛋白表达明显降低(P<0.01),Ac-FoxO1及自噬相关蛋白Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ的表达量升高(P<0.01)。与HIBD组比较，TFs+HIBD组新生大鼠精神状态好转，神经功能缺损评分下降(P<0.05),体质量增长较快(P<0.01),翻正反射时间缩短(P<0.05),右侧脑组织质量减轻(P<0.05),HE染色可见脑组织神经元数目增多，SIRT1、FoxO1蛋白表达升高(P<0.01),Ac-FoxO1及自噬相关蛋白的表达量降低(P<0.01)。与TFs+HIBD组比较，TFs+HIBD+Ex-527组新生大鼠神经功能缺损评分升高(P<0.05),体质量增长迟缓(P<0.01),翻正反射时间延长(P<0.05),右侧脑组织质量增大(P<0.05),HE染色可见脑组织神经元细胞减少，SIRT1、FoxO1蛋白表达降低(P<0.01),Ac-FoxO1及自噬相关蛋白的表达量升高(P<0.01)。结论 TFs可通过激活SIRT1/FoxO1信号转导通路抑制HIBD引起的过度细胞自噬，从而减轻神经元细胞的损伤。

关键词

HIBD / TFs / SIRT1 / FoxO1 / 细胞自噬