EZH2对结直肠肿瘤行为学的影响及其机制

摘要

目的 探究EZH2对结直肠肿瘤行为学的影响及其作用机制。方法 （1）将40只BALB/c-nu裸鼠随机分为4组：EZH2-NC组、EZH2-OE组、EZH2-NC+PD1抑制剂组、EZH2-OE+PD1抑制剂组。按照Lipofectamine^TM2000转染法将SW480细胞稳定转染EZH2空载体质粒或EZH2过表达载体，取转染成功SW480细胞溶液分别注入小鼠右侧腋窝皮下构建皮下移植瘤模型，然后EZH2-NC+PD1抑制剂组和EZH2-OE+PD1抑制剂组小鼠尾静脉注射PD1抑制剂（150μg/mL）,21 d后观察肿瘤体积。（2）SW480稳转细胞分为4组：EZH2-NC组、EZH2-OE组、EZH2-NC+PD1抑制剂组（转染成功后加入1.5 ng/mL PD1抑制剂）、EZH2-OE+PD1抑制剂组（转染成功后加入1.5 ng/mL PD1抑制剂）。将以上4组SW480细胞和THP-1细胞进行共培养，应用CCK-8实验、划痕实验、Transwell实验分别检测SW480细胞增殖、迁移和侵袭能力。应用Western blot实验检测THP-1细胞中XBP-1、Cat K、Cat L、IL-6和Arg-1的蛋白表达水平和SW480细胞中的EZH2、p-STAT3、PD-1蛋白的表达水平。结果 （1）裸鼠成瘤结果显示，与EZH2-NC组相比，EZH2-OE组肿瘤体积增大（P<0.01）;与EZH2-NC+PD-1组相比，EZH2-OE+PD-1抑制剂组肿瘤体积差异无统计学意义。（2）将SW480细胞和THP1细胞进行共培养后，与EZH2-NC组相比，EZH2-OE组SW480细胞增殖、迁移、侵袭能力增强（P<0.01）;与EZH2-NC+PD-1抑制剂组相比，EZH2-OE+PD-1抑制剂组SW480细胞增殖、迁移、侵袭能力差异无统计学意义。与EZH2-NC组相比，EZH2-OE组THP-1细胞中IL-6和Arg-1蛋白水平升高（P<0.05）;与EZH2-NC组相比，EZH2-NC+PD1抑制剂组IL-6和Arg-1蛋白水平下降（P<0.01）;与EZH2-OE组相比较，EZH2-OE+PD1抑制剂组IL-6和Arg-1蛋白水平下降（P<0.01）。与EZH2-NC组相比，EZH2-OE组THP-1细胞中XBP-1、Cat K和Cat L蛋白水平升高（P<0.01）;与EZH2-NC组比，EZH2-NC+PD-1抑制剂组XBP-1、Cat K和Cat L蛋白水平下降（P<0.01）;与EZH2-OE组相比，EZH2-OE+PD-1抑制剂组XBP-1、Cat K和Cat L蛋白水平下降（P<0.01）。与EZH2-NC组相比，EZH2-OE组SW480细胞中EZH2、p-STAT3和PD-1蛋白水平升高（P<0.01）;与EZH2-NC+PD-1抑制剂组相比，EZH2-OE+PD-1抑制剂组EZH2和p-STAT3蛋白水平升高（P<0.05）。结论 EZH2通过上调STAT3/PD-1通路进而影响肿瘤相关巨噬细胞产生对结直肠癌进展发挥促进作用。

关键词

EZH2 / STAT3 / PD-1 / 结直肠癌 / 肿瘤相关巨噬细胞