依达拉奉右莰醇对缺血性脑卒中大鼠神经炎症的抑制作用及其机制

摘要

目的 探讨依达拉奉右莰醇减轻缺血性脑卒中(IS)神经炎症反应的作用机制。方法 SD大鼠随机分为假手术组、模型组、依达拉奉右莰醇(EDB)组、依达拉奉组，每组各9只。模型组及给药组用中动脉栓塞法(MCAO)建立IS大鼠模型，假手术组除不予线栓处理外与模型组操作一致。栓塞2 h后拔栓，同时EDB组和依达拉奉组分别尾静脉注射2.5 mg/kg的EDB和依达拉奉，假手术组和模型组大鼠注射等量生理盐水。采用神经功能评分评估神经功能损伤程度；2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察脑梗死面积；酶联免疫吸附试验(ELISA)法检查脑组织炎症因子白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素1β(IL-1β)含量；RT-PCR检测大鼠脑组织趋化因子(CCL2、CCL5、CCR5、CCL7、CXCL1、CXCL2和CXCL12)、TLR4和NF-κB的mRNA表达量。BV2细胞随机分为对照组、脂多糖(LPS)组(10μg/mL)、依达拉奉右莰醇低、中、高浓度组(5,10,50μg/mL)、依达拉奉组(10μg/mL)。模型及给药组用10μg/mL LPS诱导24 h构建BV2细胞炎症模型，给药组于LPS诱导24 h后分别给于不同浓度的依达拉奉右莰醇和依达拉奉干预24 h。一氧化氮(NO)试剂盒检测各组NO产生量；RT-PCR和Western blot检测CCL2、TLR4和NF-κB的mRNA及蛋白表达量。结果 与模型组比较，EDB组大鼠神经功能缺损明显改善(P<0.01)、脑梗死区域显著降低(P<0.01)、脑组织中炎症因子(IL-6、TNF-α和IL-1β)含量显著降低(P<0.01);与依达拉奉组比较，EDB组神经功能学评分、脑梗死体积及炎症因子降低(P<0.05)。与假手术组比较，模型组趋化因子CCL2、CXCL12、CCL7、CXCL2、CCL5和CXCL1的mRNA表达量均显著升高(P<0.01),其中以CCL2的mRNA表达量增高最为显著(P<0.01);与模型组比较，EDB组CCL2、CXCL12、CXCL1、CXCL2、CCL5的mRNA表达量均显著降低(P<0.01);与依达拉奉组相比，EDB组CCL2的mRNA表达量降低更显著(P<0.05)。与模型组比较，EDB组大鼠脑组织中CCL2、TLR4、NF-κB的mRNA表达量显著降低(P<0.01);与依达拉奉组比较，EDB组大鼠脑组织中CCL2、NF-κB的mRNA表达量降低(P<0.05)。与LPS组比较，EDB组BV2细胞中NO含量明显下降，以高剂量组最显著(P<0.01),CCL2、TLR4、NF-κB的mRNA和蛋白表达量均显著降低(P<0.01);与依达拉奉组比较，EDB组CCL2和TLR4的mRNA表达量降低(P<0.05),TLR4和NF-κB蛋白的表达量降低(P<0.05)。结论 EDB可能通过抑制CCL2-NF-κB信号通路抑制缺血性脑卒中大鼠神经炎症。

关键词

缺血性脑卒中 / 依达拉奉右莰醇 / 神经炎症 / 大脑中动脉栓塞 / CCL2 / NF-κB