厚朴酚对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和程序性坏死的影响

摘要

目的 探究厚朴酚对人乳腺癌MCF-7细胞的增殖和程序性坏死的影响及作用机制。方法 体外培养人乳腺癌细胞株MCF-7,分别用0,5,10,20,40,80μmol/L厚朴酚处理24,48,72 h;用40μmol/L厚朴酚及40μmol/L Nec-1(坏死性凋亡抑制剂)+40μmol/L厚朴酚处理细胞24 h,然后采用MTT法检测细胞增殖水平。MCF-7细胞分别用0,2,4,8μmol/L厚朴酚处理细胞10 d,采用平板克隆实验检测MCF-7细胞集落形成能力。透射电镜下观察40μmol/L厚朴酚作用24 h后MCF-7细胞的超微结构。MCF-7细胞分别用0,10,20,40,80μmol/L厚朴酚处理24 h,采用流式细胞术检测细胞坏死率和活性氧(ROS)水平；采用Western blot检测受体相互作用蛋白1(RIP1)、受体相互作用蛋白3(RIP3)、磷酸化RIP3(p-RIP3)、混合谱系激酶结构域样蛋白(MLKL)、磷酸化MLKL(p-MLKL)蛋白表达水平。结果 与0μmol/L厚朴酚相比，5,10,20,40,80μmol/L厚朴酚作用后MCF-7细胞存活率呈剂量依赖性下降(P<0.01)。与厚朴酚组相比，厚朴酚+Nec-1组细胞存活率明显增高(P<0.01)。与0μmol/L厚朴酚相比，2,4,8μmol/L厚朴酚显著抑制细胞集落形成(P<0.01)。电镜结果显示40μmol/L厚朴酚作用24 h后MCF-7细胞膜表面均出现空泡结构，部分空泡破裂，符合细胞程序性坏死的部分特征。与0μmol/L厚朴酚相比，10,20,40,80μmol/L厚朴酚处理后MCF-7细胞坏死率、ROS水平和细胞中RIP1、RIP3、p-RIP3、MLKL、p-MLKL蛋白表达均升高，差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论 厚朴酚能诱导人乳腺癌MCF-7细胞程序性坏死，其机制可能与激活RIP3-MLKL信号通路有关。

关键词

厚朴酚 / 乳腺癌 / 细胞增殖 / 程序性坏死 / RIP3 / ROS