小鼠SGK3真核表达载体的构建及鉴定

摘要

目的 构建含有小鼠血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶3(serum and glucocorticoid-induced protein kinase 3,SGK3)基因的真核表达载体pcDNA3.1-MYC-SGK3-mCherry,并观察和验证其在转染细胞HEK293中的表达。方法 通过聚合酶链式反应将实验室保存的真核表达质粒pcDNA3.1-MYC-SGK3中目的基因SGK3与mCherry融合并扩增出来，然后定向克隆至pcDNA3.1-MYC质粒中，经限制性内切酶消化和测序证实后，通过脂质体法转染HEK293细胞，Western blotting法检测目的基因的蛋白表达情况。结果 测序结果与之前预期结果相符，证实pcDNA3.1-MYC-SGK3-mCherry真核表达载体构建成功。Western blotting结果显示，转染pcDNA3.1-MYC-SGK3-mCherry的HEK293细胞出现清晰的阳性反应条带，说明目的片段成功表达。结论 pcDNA3.1-MYC-SGK3-mCherry真核表达载体构建成功。

关键词

血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶3 / 真核表达载体 / 聚合酶链式反应 / 限制性内切酶 / HEK293细胞 / 载体构建