抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性测定方法的建立

摘要

目的 建立基于报告基因的抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性检测方法。方法 以WIL2-S细胞系作为靶细胞，以Jurkat-NF-κB-Luc转基因细胞系作为效应细胞，对抗体的量效范围、孵育时间、诱导时间、效靶比及细胞接种密度进行优化，构建可用于测定抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性的报告基因法。依据ICHQ2的指导原则对方法进行全面验证，包括专属性、准确性、精密度、线性、稳定性。结果 成功建立了具有量效关系的抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性检测方法，该方法的抗体起始浓度为500 ng/mL,稀释倍数为1∶4,共计8个浓度点（500,125,31.25,7.81,1.95,0.49,0.12,0.031 ng/mL）,效靶比为4∶1,诱导时间为4 h。本方法具有良好的专属性；5个不同稀释组回收率样品经测定，相对效价分别为59.63%±4.57%,75.54%±4.05%,99.98%±9.63%,123.90%±5.54%和142.51%±12.82%;对应的回收率分别为93.17%±7.15%,94.42%±5.06%,99.98%±9.63%,99.12%±4.43%以及91.21%±8.21%,CV分别为7.67%,5.35%,9.63%,4.47%和9.00%,上述结果的变异系数CV值均<10%;实测效价与理论效价线性回归分析相关系数R²=0.982 3,线性良好；本研究建立的方法可以敏感检测出抗体结构变化对生物活性的影响，对双特异性抗体的稳定性检测有一定的指导意义。结论 利用转基因细胞法成功建立了抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性检测方法，该方法专属性强、准确性高、重复性好，可用于评价抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性。

关键词

抗CD3/CD20双特异性抗体 / 双特异性抗体 / 生物学活性 / 报告基因 / 优化 / 验证