莲心碱通过抑制细胞自噬减轻体外胰腺腺泡细胞急性炎症反应

摘要

目的 探讨莲心碱(liensinine, LSN)对雨蛙素诱导的急性胰腺炎细胞模型的保护作用及其分子机制。方法 胰腺腺泡细胞AR42J分为对照组、模型组、20μmol/L LSN组和40μmol/L LSN组。模型组加入雨蛙素刺激造模；20μmol/L LSN组和40μmol/L LSN组加入LSN预处理12 h,再加入雨蛙素刺激造模。采用Western blot检测LC3、Beclin-1和p62蛋白表达水平，采用ELISA法检测炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)分泌水平，采用淀粉酶活性检测试剂盒检测淀粉酶含量，采用Calcein AM细胞活性检测试剂盒检测细胞存活率，采用乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase, LDH)细胞毒性检测试剂盒检测细胞损伤，采用TUNEL法检测细胞凋亡。结果 与对照组比较，模型组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比率和Beclin-1蛋白水平显著升高(P<0.01),而p62蛋白水平显著降低(P<0.01);与模型组比较，20μmol/L LSN组和40μmol/L LSN组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比率和Beclin-1蛋白水平显著降低(P<0.05),而p62蛋白水平显著升高(P<0.05);与20μmol/L LSN组比较，40μmol/L LSN组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比率和Beclin-1蛋白水平显著减少(P<0.05),而p62蛋白水平显著增加(P<0.05)。与对照组比较，模型组IL-1β、IL-6和TNF-α分泌水平显著增加(P<0.01),淀粉酶活性显著升高(P<0.01),细胞存活率显著降低(P<0.01),LDH活性显著升高(P<0.01),细胞凋亡率显著增加(P<0.01);与模型组比较，20μmol/L LSN组和40μmol/L LSN组IL-1β、IL-6和TNF-α分泌水平显著降低(P<0.05),淀粉酶活性显著下降(P<0.05),细胞存活率显著升高(P<0.05),LDH活性显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著下降(P<0.05);与20μmol/L LSN组比较，40μmol/L LSN组IL-1β、IL-6和TNF-α分泌水平显著减少(P<0.05),淀粉酶活性显著降低(P<0.05),细胞存活率显著提高(P<0.05),LDH活性显著下降(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。结论 莲心碱可有效保护雨蛙素诱导的胰腺腺泡细胞损伤，其作用机制可能与抑制细胞自噬相关。

关键词

急性胰腺炎 / 胰腺腺泡细胞 / 细胞自噬 / 莲心碱 / 炎症反应 / 细胞损伤 / 细胞凋亡