鞘氨醇-1-磷酸对肺成纤维细胞活性的作用及其机制

摘要

目的 探讨鞘氨醇-1-磷酸（sphingosine-1-phosphate, S1P）对肺成纤维细胞活性的影响及其可能机制。方法 以0,0.01,0.03,0.1,0.3,1,3μmol/L S1P干预肺成纤维细胞24 h，筛选最佳干预浓度；随后以确定的S1P干预浓度刺激细胞0,24,48,72 h,CCK-8法检测细胞增殖。将肺成纤维细胞分为对照组、S1P组、JTE013+S1P组、CAY10444+S1P组、control siRNA+S1P组和YAP siRNA+S1P组。S1P组以1μmol/L S1P干预肺成纤维细胞24 h;JTE013+S1P组和CAY10444+S1P组细胞先分别用10μmol/L选择性S1P受体2(sphingosine-1-phosphate receptor 2, S1PR2)拮抗剂JTE013或10μmol/L选择性S1PR3拮抗剂CAY10444预处理1 h后再给予1μmol/L S1P干预24 h;control siRNA+S1P组和YAP siRNA+S1P组细胞先分别转染control siRNA或YAP siRNA，再给予1μmol/L S1P干预24 h。CCK-8法检测细胞增殖；免疫印迹法检测t-Yes相关蛋白（Yes-associated protein, YAP）、p-YAP、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin, α-SMA）、Ⅰ型胶原蛋白（CollagenⅠ）、纤维粘连蛋白（Fibronectin）水平。结果 S1P干预后，肺成纤维细胞增殖随浓度和时间依赖性增加（P<0.05），筛选最佳干预浓度为1μmol/L。与对照组相比，S1P组细胞p-YAP水平减少（P<0.001）,α-SMA、CollagenⅠ和Fibronectin蛋白水平增多（P<0.05）。与S1P组相比，JTE013+S1P组和CAY10444+S1P组细胞p-YAP水平均增多（P<0.05）,α-SMA、CollagenⅠ和Fibronectin蛋白水平均减少（P<0.05），细胞增殖均受到抑制（P<0.05）；细胞增殖均受到抑制（P<0.05）；且JTE013的作用效果较CAY10444显著（P<0.05）;YAP siRNA+S1P组细胞α-SMA、CollagenⅠ和Fibronectin蛋白水平，以及细胞增殖均降低（P<0.05）。结论 S1P通过与S1PR2/3结合激活YAP，诱导肺成纤维细胞活化。

关键词

S1P / S1PR2/3 / 肺纤维化 / 肺成纤维细胞 / YAP