IL-10受体沉默的树突状细胞瘤苗对食管鳞癌细胞体内外免疫活性的影响

摘要

目的 探讨IL-10受体（IL-10R）沉默的树突状细胞（DC）瘤苗对食管鳞癌细胞体内外免疫活性的影响。方法 从食管鳞癌患者外周血中提取DC，使用倒置显微镜和扫描电镜对DC细胞形态进行鉴定，流式细胞仪上机检测DC细胞的表型。将TE11细胞分为空白对照组、DC-CTL组、NC-shRNA-DC-CTL组和IL-10R-shRNA-DC-CTL组。制作负载热休克凋亡的TE11细胞抗原的DC，然后使用Lipofectamine 3000分别进行IL-10R-shRNA慢病毒和NC-shRNA慢病毒转染，最后通过不同处理的DC诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）。通过MTT法检测DC对TE11细胞的杀伤率，采用ELISA法检测TE11细胞培养上清液中IL-12和干扰素（IFN）-γ含量。将荷瘤小鼠随机分为对照组、未转染的DC组（DC组）、NC-shRNA-DC组和IL-10R-shRNA-DC组，每组6只。将DC悬液或生理盐水注射至小鼠淋巴结，每周注射1次，共注射4次。每隔7 d用游标卡尺测量肿瘤体积。采用免疫组织化学染色检测肿瘤组织中Ki67表达水平，TUNEL染色检测肿瘤组织TUNEL阳性率，流式细胞术分析肿瘤浸润淋巴细胞中CD8⁺T细胞的比例，采用ELISA法检测肿瘤组织中IL-12和IFN-γ水平，采用RT-qPCR检测肿瘤组织中IL-10 mRNA和IL-10R mRNA水平。采用Western blot检测肿瘤组织中IL-10、IL-10R、信号转导子和转录激活子3（STAT3）、p-STAT3、程序性细胞死亡蛋白1（PD-1）和程序性死亡配体1（PD-L1）的蛋白表达水平。结果 倒置显微镜和扫描电镜证实分离的细胞符合DC形态学，DC的特异性标志物CD11c、MHC-Ⅱ、HLA-DR和CD83的阳性率分别为91.43%,89.53%,88.62%和90.74%。与空白对照组相比，DC-CTL组、NC-shRNA-DC-CTL组和IL-10R-shRNA-DC-CTL组TE11细胞杀伤率升高（P<0.05）,TE11细胞培养上清液中IL-12和IFN-γ的水平升高（P<0.05）；与DC-CTL组和NC-shRNA-DC-CTL组相比，IL-10R-shRNA-DC-CTL组TE11细胞杀伤率升高（P<0.05）,TE11细胞培养上清液中IL-12和IFN-γ的水平升高（P<0.05）。与对照组相比，DC组、NC-shRNA-DC组和IL-10R-shRNA-DC组大鼠肿瘤体积和Ki67阳性率降低（P<0.05）,TUNEL阳性率升高（P<0.05），肿瘤浸润淋巴细胞中CD8⁺T细胞比例及肿瘤组织中IL-12和IFN-γ的水平升高（P<0.05），肿瘤组织中IL-10和IL-10R mRNA和蛋白水平、STAT3磷酸化水平以及PD-1和PD-L1蛋白水平降低（P<0.05）；与DC组和NC-shRNA-DC组相比，IL-10R-shRNA-DC组肿瘤体积和Ki67阳性率降低（P<0.05）,TUNEL阳性率升高（P<0.05），肿瘤浸润淋巴细胞中CD8⁺T细胞比例及肿瘤组织中IL-12和IFN-γ的水平升高（P<0.05），肿瘤组织中IL-10和IL-10R mRNA和蛋白水平、STAT3磷酸化水平以及PD-1和PD-L1蛋白水平降低（P<0.05）。结论 IL-10R沉默的DC瘤苗具有体内外抗食管鳞癌活性，可有效增强CD8⁺T细胞免疫活性，抑制STAT3激活以及PD-1/PD-L1免疫检查点。

关键词

食管鳞癌 / 树突状细胞瘤苗 / 白细胞介素-10受体 / 免疫 / 抗原呈递能力 / 信号转导子和转录激活子3 / 程序性细胞死亡蛋白1