中介素预处理对NRK-52E细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其机制

摘要

目的 探讨中介素（intermedin,IMD）在缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation,H/R）条件下对大鼠近端肾小管上皮细胞（NRK-52E）损伤的保护作用及其机制。方法 体外培养NRK-52E细胞，随机分为空白对照（NC）组、氯化钴（CoCl2）组和IMD+CoCl2组；采用1.5×10-4 mol/L CoCl2处理24 h建立NRK-52E细胞H/R模型，IMD+CoCl2组采用IMD 20 ng/mL预处理4 h，保持IMD浓度（20 ng/mL）用1.5×10-4 mol/L CoCl2处理24 h。流式细胞术检测细胞凋亡率，DCFH-DA探针法检测细胞内活性氧（ROS）含量，JC-1探针法检测线粒体膜电位（MMP）,real time-PCR法检测凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Caspase-3，以及氧化应激蛋白血红素加氧酶-1(HO-1)和内皮型一氧化氮合酶（eNOS）mRNA表达水平，Western blot法检测Bcl-2、Caspase-3、HO-1和eNOS蛋白表达。结果 与NC组相比，CoCl2组细胞凋亡率增加（P<0.01）;ROS生成增加，MMP下降，同时Caspase-3表达增加（P<0.01）,Bcl-2表达降低（P<0.01）；与CoCl2组相比，IMD+CoCl2组细胞凋亡率显著下降（P<0.01）,ROS生成显著减少而MMP显著增加，此外Caspase-3 mRNA及蛋白表达均下调（P<0.01）,Bcl-2及eNOS、HO-1表达显著增加（P<0.05）。结论IMD能够改善NRK-52E细胞H/R诱导的损伤，其可能的机制是通过抑制H/R诱导的细胞凋亡和氧化应激，上调Bcl-2及eNOS、HO-1表达。

关键词

中介素 / 缺氧/复氧 / NRK-52E细胞 / 细胞凋亡 / 氧化应激 / 线粒体膜电位