SRPK1促进肺腺癌进展的机制研究

摘要

目的 探究丝氨酸-精氨酸蛋白激酶1（serine-arginine protein kinase 1,SRPK1）在肺腺癌中的表达及其促进肺腺癌恶性进展的机制。方法 检索Human Protein Atlas数据库，比较SRPK1在正常肺组织和肺腺癌组织的表达水平；检索Kaplan Meier Plotter数据库，分析SRPK1的表达水平与肺腺癌患者生存预后的关系。采用慢病毒感染法在肺腺癌细胞A549、H1299中稳定过表达SRPK1，通过RT-qPCR和Western blot检测对照组和SRPK1过表达组细胞中SRPK1的表达水平。检索文献寻找SRPK1影响肿瘤进展的可能机制，通过Western blot检测对照组和SRPK1过表达组细胞中黏着斑激酶（focal adhesion kinase,FAK）及pFAK（Y397）的表达水平；检索癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas,TCGA）数据库中肺腺癌队列的RNA-Seq数据，对SRPK1和丝氨酸蛋白酶抑制剂mRNA结合蛋白1（serpine 1 mRNA binding protein 1,SERBP1）的表达进行皮尔森相关性分析。通过细胞免疫荧光实验鉴定A549和H1299细胞中SRPK1和SERBP1的共定位情况；通过co-IP实验鉴定A549和H1299细胞中SRPK1和SERBP1的结合情况；采用慢病毒感染法在A549和H1299中稳定过表达SERBP1，通过RT-qPCR和Western blot检测对照组和SERBP1过表达组细胞中SERBP1的表达水平；通过RT-qPCR检测对照组和SERBP1过表达组细胞中SRPK1的表达水平；通过Western blot检测对照组和SERBP1过表达组细胞中SRPK1、FAK、pFAK（Y397）的表达水平。结果 Human Protein Atlas数据库的数据显示，与正常肺组织相比，肺腺癌组织中SRPK1表达明显上调；Kaplan Meier Plotter数据库中数据显示，SRPK1表达水平越高，肺腺癌患者的预后越差(P=1.5×10^-8)。RT-qPCR和Western blot结果显示，与对照组相比，SRPK1过表达组细胞SRPK1的表达水平上调（P<0.001）;Western blot结果显示，与对照组相比，SRPK1过表达组细胞中FAK的表达基本不变，pFAK（Y397）的表达上调。皮尔森相关性分析显示，在TCGA数据库的肺腺癌队列数据中，SERBP1的基因表达与SRPK1的基因表达呈正相关(P=2.2×10^-16)。细胞免疫荧光结果显示，在A549和H1299细胞中SRPK1和SERBP1存在共定位；co-IP结果显示，在A549和H1299细胞中SRPK1和SERBP1可以相互结合；RT-qPCR结果显示，与对照组相比，SERBP1过表达组细胞SERBP1和SRPK1的表达水平均上调（P<0.01）;Western blot结果显示，与对照组相比，SERBP1过表达组细胞中SRPK1表达上调，FAK的表达基本不变，pFAK（Y397）的表达上调。结论 在肺腺癌细胞中，SRPK1的表达异常升高，并可通过激活磷酸化FAK信号促进肺腺癌的恶性进展，SERBP1可以结合SRPK1并调控上述过程。

关键词

肺腺癌 / 丝氨酸-精氨酸蛋白激酶1 / 黏着斑激酶 / 丝氨酸蛋白酶抑制剂mRNA结合蛋白1 / 恶性进展 / 预后