HPLC法同时测定单抗药物中海藻糖、甘露醇和山梨醇的含量

摘要

目的 建立同时检测单抗药物中海藻糖、甘露醇和山梨醇含量的方法。方法 采用伯乐碳水化合物快速分析高效液相色谱柱（7.8 mm×100 mm,9μm）进行海藻糖、甘露醇和山梨醇含量的测定，以超纯水为流动相，流速为0.5 mL/min，柱温为65℃，检测器为示差折光检测器。结果 该方法专属性良好，在海藻糖、甘露醇和山梨醇的保留时间范围内，无分析溶剂的干扰。海藻糖、甘露醇和山梨醇含量在0.16～1.60 mg/mL范围内，进样量与峰面积均呈良好的线性关系（R²>0.99）。对单抗药物同时加标0.4 mg/mL海藻糖、0.4 mg/mL甘露醇和0.4 mg/mL山梨醇的样品进行6次独立测定，其海藻糖、甘露醇和山梨醇含量的变异系数分别为1.52%,2.54%和2.33%；对单抗药物同时加标0.8 mg/mL海藻糖、0.8 mg/mL甘露醇和0.8 mg/mL山梨醇的样品进行6次独立测定，其海藻糖、甘露醇和山梨醇含量的变异系数分别为0.69%,0.27%和0.18%；对单抗药物同时加标1.2 mg/mL海藻糖、1.2 mg/mL甘露醇和1.2 mg/mL山梨醇的样品进行6次独立测定，其海藻糖、甘露醇和山梨醇含量的变异系数分别为3.45%,6.55%和2.47%；以上结果均符合重复性的可接受标准（≤10%）。两名实验人员分别在3个工作日对上述3种加标溶液的海藻糖、甘露醇和山梨醇含量的样品共进行18次测定，其海藻糖含量的变异系数分别为2.08%,2.82%和10.87%；甘露醇含量的变异系数分别为2.24%,1.99%和2.53%；山梨醇含量的变异系数分别为2.54%,1.62%和1.32%；以上结果符合中间精密度的可接受标准（≤15%）。上述3种加标溶液的回收率均在97.88%～101.39%之间，符合准确度的验证要求（90%～110%）；上述3种加标溶液在（5±3）℃密封瓶条件下在自动进样器中暂存24 h后海藻糖、甘露醇和山梨醇含量的平均回收率均在93.24%～101.49%之间，符合耐用性的可接受标准（90%～110%）。结论 成功建立了同时检测单抗药物中海藻糖、甘露醇和山梨醇含量的高效液相色谱法，该方法重现性好、专属性强、精密度及准确度高，可用于单抗药物中海藻糖、甘露醇和山梨醇的质量控制。

关键词

单克隆抗体药物 / 海藻糖 / 甘露醇 / 山梨醇 / 高效液相色谱法 / 辅料 / 质量控制