基于细胞模型的抗HER2单抗耐药通路研究方法的建立及应用

摘要

目的 建立基于细胞模型的抗人类表皮生长因子受体2(HER2)单抗耐药通路研究方法。方法 从低剂量开始分别使用原研药曲妥珠（Trastuzumab）或其生物类似药候选物对HER2阳性BT474细胞进行加压筛选至药物浓度60μg/mL。利用流式细胞术检测抗HER2单抗耐药细胞株表面HER2表达量变化。利用细胞增殖抑制生物学活性测定法对加压细胞株进行耐药性验证。对耐药细胞株和敏感细胞株进行高通量转录组测序以挖掘差异表达基因（DEGs）。利用KEGG数据库对得到的DEGs进行通路富集分析，寻找耐药相关通路。结果 经过相同条件的药物加压筛选，原研药及其生物类似药候选物均不改变BT474细胞表面HER2抗原表达量。细胞增殖抑制活性实验表明两种药物的加压细胞株均呈现一定耐药性，且耐药曲线相似。转录组测序结果经过KEGG富集分析表明，与敏感细胞相比，原研药和生物类似药候选物的耐药细胞株的DEGs均在丝裂原活化蛋白激酶通路及神经活性的配体-受体相互作用通路有富集。不同的是，原研药耐药细胞株的DEGs还在黏着斑激酶通路及肌动蛋白细胞骨架调节通路上有富集，而生物类似药候选物耐药细胞株则在细胞因子-细胞因子受体相互作用通路上有富集。结论 建立了基于细胞模型的抗HER2单抗耐药通路研究方法，可用于比较原研药曲妥珠与其生物类似药候选物两者的耐药相关基因通路的异同，为单抗生物类似药的耐药研究提供参考。

关键词

曲妥珠单抗 / 生物类似药 / 耐药细胞 / 转录组测序 / 差异表达基因 / 丝裂原活化蛋白激酶通路 / 神经活性的配体-受体相互作用通路