川崎病高表达SEMA7A促进单核和中性粒细胞黏附与迁移

摘要

目的 探究川崎病（KD）条件下Semaphorin 7A(SEMA7A)对单核细胞（THP-1细胞系）和中性粒细胞（HL-60细胞系）黏附与跨内皮细胞迁移的作用。方法 将4周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组和模型组，每组6只；模型组小鼠腹腔注射干酪乳杆菌细胞壁提取物（LCWE）构建KD样血管炎小鼠模型，对照组腹腔注射等量磷酸盐缓冲液（PBS）；注射后第14天采用实时定量PCR(RT-PCR)和免疫印迹（Western blot）检测心脏组织SEMA7A表达情况。体外培养人冠状动脉内皮细胞（HCAEC）并将细胞分为健康儿童（HC）血清刺激组和KD血清刺激组，培养24 h后采用RT-PCR和Western blot检测细胞SEMA7A表达水平。KD血清刺激HCAEC分为si-NC组和si-SEMA7A组，采用RT-PCR法检测敲减效率。将四组HCAEC分别接种于Transwell上室形成细胞单层，与THP-1和HL-60细胞分别共培养后，利用荧光标记和Transwell实验检测黏附和跨内皮迁移的细胞数量。结果 与对照组相比，模型组小鼠心脏组织SEMA7A的mRNA和蛋白表达均升高（P<0.01）。体外实验发现，KD血清刺激组SEMA7A的mRNA和蛋白表达均高于HC血清刺激组（P<0.01）,si-SEMA7A组SEMA7A的mRNA表达低于siNC组（P<0.01）。KD血清刺激组HCAEC单层黏附的THP-1和HL-60细胞数量高于HC血清刺激组（P<0.05）,si-SEMA7A组黏附的THP-1和HL-60细胞数量低于si-NC组（P<0.05）。Transwell迁移实验表明，KD血清刺激组THP-1和HL-60跨内皮细胞迁移的数量高于HC血清刺激组（P<0.01）,si-SEMA7A组THP-1和HL-60跨内皮细胞迁移的数量较si-NC组明显下降（P<0.05）。结论 川崎病条件下高表达的SEMA7A能够促进单核细胞和中性粒细胞的内皮细胞黏附与和跨内皮细胞迁移。

关键词

信号素7A / 川崎病 / 单核细胞 / 中性粒细胞 / 内皮细胞 / 细胞黏附 / 迁移

基金资助

陕西省自然科学基础研究计划项目（2024JC-YBQN-0869,2023-JC-YB-718）; 西安市科技计划项目（24YXYJ0064）; 西安市卫生健康委员会科研项目（2023qn12）; 陕西省大学生创新创业训练计划项目（S202311840077,S202311840070）; 西安医学院大学生创新创业训练计划项目（121523077,121523070）