敲低MUC5B表达对分泌性中耳炎大鼠炎症反应的影响

摘要

目的 探究黏蛋白5B(MUC5B)对分泌性中耳炎（SOM）炎症反应的调控作用，以及与中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）形成的关系。方法 采用腹腔注射卵清蛋白构建SOM大鼠模型，随机分为模型组、shRNA-NC组和shRNA-MUC5B组，每组10只，另取10只健康SD大鼠作为对照组。末次注射完成后24 h，进行大鼠炎症评分，采用HE染色检测大鼠中耳黏膜组织病变，ELISA法检测中耳灌洗液中炎性因子的表达，流式细胞术检测Th1和Th2细胞分布比例，免疫荧光染色检测中耳黏膜组织中NETs标志物髓过氧化物酶（MPO）和瓜氨酸化组蛋白H3(CitH3)的表达，DCFH-DA探针检测中耳黏膜组织中ROS水平。RTqPCR检测MUC5B基因的表达水平，Western blot检测干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)、IL-4、IL-13、MUC5B、MPO、CitH3和中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）蛋白的表达水平。结果 与对照组比较，模型组和shRNA-NC组大鼠表现出中耳黏膜增厚，炎症程度评分升高（P<0.05）；中耳黏膜组织中MUC5B mRNA水平，CitH3、MPO、MUC5B、IL-4和IL-13蛋白水平，Th2细胞比例以及ROS水平均升高（P<0.05）,IFN-γ和IL-2蛋白水平以及Th1细胞比例和Th1/Th2比值均降低（P<0.05）；中耳灌洗液中MPO、NE和CitH3蛋白水平以及IL-4和IL-13含量均升高（P<0.05）,IFN-γ和IL-2含量以及IFN-γ/IL-4比值均降低（均P<0.05）。与shRNA-NC组比较，shRNA-MUC5B组大鼠中耳黏膜厚度和炎症程度评分均降低（P<0.05）；中耳黏膜组织中MUC5B mRNA水平，CitH3、MPO、MUC5B、IL-4和IL-13蛋白水平，Th2细胞比例以及ROS水平均降低（P<0.05）,IFN-γ和IL-2蛋白水平以及Th1细胞比例和Th1/Th2比值均升高（P<0.05）；中耳灌洗液中MPO、NE和CitH3蛋白水平以及IL-4和IL-13含量均降低（P<0.05）,IFN-γ和IL-2含量以及IFN-γ/IL-4比值均升高（P<0.05）。结论 MUC5B敲低表达可以缓解SOM大鼠中耳黏膜组织炎症反应，该作用可能与抑制NETs的形成有关。

关键词

黏蛋白5B(MUC5B) / 分泌性中耳炎 / 炎症反应 / 中性粒细胞胞外诱捕网(NETs) / 中耳黏膜 / Th1/Th2