三七皂苷R1对小鼠颞下颌关节疼痛和肠道菌群的影响

摘要

目的 探讨三七皂苷R1(NGR1)对小鼠颞下颌关节疼痛（TMJP）的缓解作用及机制，分析NGR1对肠道菌群的影响。方法 将C57BL/6J小鼠随机分为5组（n=12）：假手术组、TMJP组、12.5NGR1组、25NGR1组和50NGR1组。假手术组小鼠双侧颞下颌关节（TMJ）腔内注射10μL生理盐水，其他组小鼠双侧TMJ腔内注射完全弗氏佐剂（5 mg/mL）诱导TMJP小鼠模型。注射完成后1 h,12.5NGR1组、25NGR1组和50NGR1组小鼠分别腹腔注射12.5,25,50 mg/kg的NGR1，其他组腹腔注射生理盐水，每天注射1次，连续4 d。给药结束后24 h，测定小鼠面部机械刺激疼痛阈值。HE染色观察颞下颌关节软骨组织形态，甲苯胺蓝（TB）染色检测颞下颌关节软骨组织蛋白聚糖水平。免疫组化法检测颞下颌关节软骨组织基质金属蛋白酶13(MMP13)和白细胞介素（IL）-1β的表达。ELISA法检测血清IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-6水平。免疫荧光染色检测脑组织Iba-1和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达。RT-qPCR和Western blot分别检测脑组织中诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）、IL-1β、TNF-α、IL-10和精氨酸酶-1(Arg-1)的mRNA和蛋白表达水平。RT-qPCR分析粪便样本中拟杆菌门（Bacteroidetes）和毛螺菌科（Lachnospiraceae）细菌含量。结果 与假手术组相比，TMJP组小鼠的面部机械刺激疼痛阈值降低（P<0.05），颞下颌关节出现明显病变，颞下颌关节软骨组织蛋白聚糖含量降低（P<0.05）,MMP13和IL-1β水平升高（P<0.05），血清TNF-α、IL-1β和IL-6水平升高（P<0.05），脑组织中Iba-1相对荧光强度升高（P<0.05），脑组织中iNOS、IL-1β和TNF-α的mRNA和蛋白水平升高（P<0.05），拟杆菌门和毛螺菌科菌群的含量降低（P<0.05）。与TMJP组相比，12.5NGR1组、25NGR1组和50NGR1组小鼠的面部机械刺激疼痛阈值升高（P<0.05），颞下颌关节病变减轻，颞下颌关节软骨组织蛋白聚糖含量升高（P<0.05）,MMP13和IL-1β水平降低（P<0.05），血清TNF-α、IL-1β和IL-6水平降低（P<0.05），脑组织中Iba-1相对荧光强度降低（P<0.05），脑组织中iNOS、IL-1β和TNF-α水平降低（P<0.05），拟杆菌门和毛螺菌科菌群的含量升高（P<0.05）。与12.5NGR1组和25NGR1组相比，50NGR1组小鼠的上述测量指标差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 NGR1可有效缓解TMJP，抑制小胶质细胞M1型标志物的表达并促进M2型标志物的表达，改善肠道菌群结构。

关键词

颞下颌关节 / 疼痛 / 三七皂苷R1 / 小胶质细胞 / 肠道菌群 / 表型