实时荧光重组酶聚合酶扩增技术快速检测创伤弧菌方法的建立

摘要

目的 建立一种基于实时荧光重组酶聚合酶扩增（recombinant polymerase amplification,RPA）技术快速检测创伤弧菌的方法。方法 根据编码创伤弧菌溶血素vvhA基因的保守序列设计RPA引物，通过琼脂糖凝胶电泳筛选出最佳引物；根据筛选出的引物设计实时荧光探针，并建立实时荧光RPA检测体系。通过检测金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、铜绿假单胞菌、河流弧菌、溶藻弧菌等10种其他菌种评价检测体系的特异性；通过检测梯度稀释的创伤弧菌基因组DNA评价检测体系的灵敏度。用qPCR试剂盒平行检测10例模拟临床样本，验证检测体系的性能。结果 基于创伤弧菌vvhA基因保守序列建立起实时荧光RPA检测体系，该体系对金黄色葡萄球菌等10种其他菌种基因组DNA均无交叉反应。检测创伤弧菌的灵敏度为1×10～2 CFU/mL；检测模拟临床样本结果与qPCR方法的结果一致，准确率和检出率均为100%。结论 本研究建立的实时荧光RPA检测创伤弧菌方法灵敏度高、特异性强，操作简单快速，为创伤弧菌的现场快速检测提供一种新途径。

关键词

创伤弧菌 / vvhA基因 / 重组酶聚合酶扩增 / 核酸扩增 / 分子检测 / 快速检测