IGF2BP3对儿童白血病细胞增殖的影响及其机制

摘要

目的 分析调控儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）进展的关键基因，探讨m6A甲基化修饰阅读蛋白胰岛素样生长因子2mRNA结合蛋白3(insulin-like growth factor 2 mRNA binding protein 3,IGF2BP3)调控白血病细胞增殖的分子机制。方法 利用GEOexplorer在线工具分析ALL治疗前后的基因表达谱差异，并结合GO分析等，筛选发生显著改变的功能差异基因。利用IGF2BP3 shRNA慢病毒和对照病毒（NC）分别感染Jurkat细胞，命名为shIGF2BP3#1组、shIGF2BP3#2组和NC组，采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、EdU掺入实验检测比较敲降IGF2BP3后白血病细胞体外增殖能力的改变。建立骨髓移植的小鼠自发白血病模型，在骨髓细胞中过表达IGF2BP3蛋白，检测IGF2BP3对小鼠生存期和白血病进展的影响，通过集落形成实验和细胞计数分析增殖能力和白细胞数量。用GO分析并绘制弦图，筛选在白血病治疗后表达改变的关键基因；用Western blot和real-time PCR实验检测敲降Jurkat细胞IGF2BP3对Midkine mRNA和蛋白表达的影响，并利用放线菌素D作用细胞不同时间检测Midkine mRNA稳定性。结果 与治疗前相比，治疗后ALL中IGF2BP3表达增加（P<0.001）。与NC组相比，shIGF2BP3#1组和shIGF2BP3#2组Jurkat细胞体外增殖能力降低（P<0.001）。过表达IGF2BP3后，自发白血病小鼠生存期缩短（P<0.001），白细胞数和集落形成能力增加（P<0.001）。GO分析显示，Midkine表达与白血病细胞增殖能力相关。GEPIA分析显示，Midkine与IGF2BP3表达呈正相关（P<0.001）。与NC组相比，shIGF2BP3#1组和shIGF2BP3#2组Midkine表达降低，且Midkine mRNA稳定性下降（P<0.001）。结论 IGF2BP3通过诱导Midkine表达促进儿童白血病细胞增殖。

关键词

急性淋巴细胞白血病 / N6-甲基腺苷修饰 / IGF2BP3 / m6A修饰阅读蛋白 / Midkine / 肝素结合细胞因子