ABCA1对肝癌细胞索拉非尼耐药的影响及其机制

摘要

目的 探究三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）对肝癌细胞索拉非尼（Sorafenib）耐药的影响及其机制。方法HepG2细胞分为3组：HepG2组、HepG2+si-NC组（转染阴性对照小干扰RNA质粒）和HepG2+si-ABCA1组（转染si-ABCA1）。Sorafenib耐药HepG2（HepG2/SR）细胞分为3组：HepG2/SR组、HepG2/SR+Vector组（转染pcDNA3.1质粒）、HepG2/SR+ABCA1组（转染pcDNA3.1-ABCA1质粒）。实时荧光定量PCR检测HepG2组和HepG2/SR组ABCA1 mRNA表达水平；Western blot检测各组细胞中ABCA1及铁死亡相关蛋白溶质载体家族7成员11（SLC7A11）和GPX4的表达；CCK-8实验检测各组细胞活力；克隆形成实验检测HepG2/SR细胞克隆形成能力；FerroOrange染色和DCFH-DA探针分别检测各组细胞中Fe²⁺离子水平和ROS水平。HepG2/SR+Vector组和HepG2/SR+ABCA1组细胞分别用蛋白合成酶抑制剂环己酰亚胺（CHX）处理0,1,2,4 h后检测SLC7A11降解水平。HepG2/SR细胞分为HepG2/SR+ABCA1+Vector组和HepG2/SR+ABCA1+SLC7A11组，然后分别检测SLC7A11和GPX4蛋白表达水平、细胞活力、细胞克隆形成能力、Fe²⁺离子和ROS水平。结果 与HepG2细胞相比，HepG2/SR细胞中ABCA1 mRNA及蛋白水平显著下降（P<0.01）。与HepG2+si-NC组相比，HepG2+si-ABCA1组细胞活力显著升高（P<0.01）。与HepG2/SR+Vector组相比，HepG2/SR+ABCA1组细胞活力和细胞克隆形成能力显著降低（P<0.01）,SLC7A11和GPX4蛋白水平显著下调（P<0.05）,Fe²⁺离子和ROS水平上调（P<0.05）。随着CHX处理时间增加，HepG2/SR+ABCA1组SLC7A11蛋白表达水平逐渐降低，而HepG2/SR+Vector组SLC7A11蛋白表达水平未发生显著变化。与HepG2/SR+ABCA1+Vector组相比，HepG2/SR+ABCA1+SLC7A11组GPX4水平、细胞活力和细胞克隆形成能力上调（P<0.05）,Fe²⁺离子和ROS水平下调（P<0.05）。结论 ABCA1可促进HepG2/SR细胞铁死亡，增加肝癌细胞对Sorafenib的敏感性。其机制与降解SLC7A11进而降低HepG2/SR细胞活力、下调SLC7A11和GPX4蛋白水平、上调Fe²⁺离子和ROS水平有关。

关键词

肝细胞癌 / 三磷酸腺苷结合盒转运体A1 / 铁死亡 / 索拉非尼 / 耐药性 / 溶质载体家族7成员11