艾司氯胺酮对大鼠软骨细胞增殖的影响及其机制

摘要

目的 探讨艾司氯胺酮（Esketamine,Esket）对大鼠软骨细胞增殖的影响及其可能机制。方法 分离并培养4周龄雄性SD大鼠股骨头上软骨细胞，在第2代软骨细胞中分别加入0,12.5,25,50,100,200μmol/L艾司氯胺酮或N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA），分别作用24,48,72 h，使用CCK-8法筛选出艾司氯胺酮和NMDA对软骨细胞增殖的无毒性浓度区间。之后将第2代软骨细胞分为3组：对照组、Esket组和Esket+NMDA组，干预24,48,72 h后，用荧光定量PCR(qPCR)法和ELISA法分别检测各组软骨细胞蛋白激酶A(PKA)、细胞外信号调节酶1/2(ERK1/2)、cAMP反应元件结合蛋白（CREB） mRNA和蛋白的表达水平。结果 CCK-8结果显示，0～200μmol/L艾司氯胺酮和NMDA对软骨细胞增殖均无明显毒性作用。qPCR和ELISA结果显示，与对照组相比，Esket组在24,48,72 h时PKA mRNA的表达差异无统计学意义（P>0.05），而在48 h时PKA蛋白表达升高（P<0.05）；在48 h时ERK1/2 mRNA表达升高（P<0.001）；在24 h时CREB mRNA表达升高（P<0.01），在48 h时CREB mRNA和蛋白表达均明显升高（P<0.05）。与Esket组相比，Esket+NMDA组PKA蛋白表达在48 h明显降低（P<0.05）;ERK1/2 mRNA在48 h表达明显降低（P<0.05）;CREB mRNA在24,48 h表达明显降低（P<0.05），其蛋白表达仅在48 h降低且差异有统计学意义（P<0.05）。结论 艾司氯胺酮可能通过拮抗NMDA受体促进PKA-ERK1/2-CREB信号通路，最终对大鼠软骨细胞增殖起到促进作用。

关键词

艾司氯胺酮 / NMDA / 软骨细胞 / 细胞增殖 / 蛋白激酶A / 细胞外信号调节酶1/2 / cAMP反应元件结合蛋白