泛素特异性蛋白酶33在乳腺癌进展中的作用及其机制

摘要

目的 探究泛素特异性蛋白酶33(ubiquitin specific peptidase 33,USP33)在乳腺癌细胞糖酵解过程中的调控作用和机制。方法 RT-qPCR和Western blot检测32例乳腺癌患者肿瘤组织和邻近非肿瘤组织中USP33的表达情况。RT-qPCR和Western blot检测正常乳腺上皮细胞MCF-10A，人乳腺癌细胞系MDA-MB-23、SKBR3、BT-474和MCF-7中USP33的表达。从乳腺癌细胞中筛选出USP33表达最高的MCF-7细胞，并转染干扰RNA，分为control组、si-NC组和si-USP33组。使用c-Myc过表达载体与USP33 siRNA共转染MCF-7细胞，分为control组、si-USP33组、pcDNA3.1-c-Myc组和si-USP33+pcDNA3.1-c-Myc组。CCK-8、划痕实验和Transwell实验分别检测MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭能力。试剂盒检测细胞中乳酸含量、ATP水平及葡萄糖摄取水平。Western blot检测细胞糖酵解相关蛋白的表达，包括葡萄糖转运体（glucose transporter type 1, GLUT1）、丙酮酸激酶M2(pyruvate kinase type M2, PKM2)和c-Myc。结果 与邻近非肿瘤组织相比，乳腺癌肿瘤组织中USP33 mRNA和蛋白表达水平显著升高（P<0.05）。与MCF-10A细胞相比，人乳腺癌细胞系MDA-MB-23、SKBR3、BT-474和MCF-7中USP33 mRNA和蛋白表达显著上调（P<0.05）。与si-NC组相比，si-USP33组MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭能力降低（P<0.05）。与si-NC组相比，si-USP33组MCF-7细胞中乳酸和ATP的水平显著降低（P<0.05），细胞对葡萄糖的摄取显著减少（P<0.05），糖酵解相关蛋白GLUT1和PKM2的表达水平显著降低（P<0.05）。与si-NC组相比，si-USP33组c-Myc的蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。与si-USP33组相比，si-USP33+pcDNA3.1-c-Myc组糖酵解蛋白的表达水平显著升高（P<0.05）。结论 干扰USP33可抑制MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭，并通过调控c-Myc的表达参与乳腺癌细胞的糖酵解进程，进而抑制乳腺癌的进展。

关键词

乳腺癌 / USP33 / 糖酵解 / GLUT1 / c-Myc / MCF-7细胞 / 细胞增殖 / 细胞迁移 / 细胞侵袭