泛素特异性蛋白酶33在乳腺癌进展中的作用及其机制

王健岗; 唐海利; 赵华栋; 师娇娇; 姬国雄; 杨小军; 陈欣; 杨小周

doi:10.13753/j.issn.1007-6611.2025.05.009

山西医科大学学报 ›› 2025, Vol. 56 ›› Issue (5) : 524 -533. DOI: 10.13753/j.issn.1007-6611.2025.05.009

泛素特异性蛋白酶33在乳腺癌进展中的作用及其机制

王健岗, 唐海利, 赵华栋, 师娇娇, 姬国雄, 杨小军, 陈欣, 杨小周

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摘要

目的探究泛素特异性蛋白酶33(ubiquitin specific peptidase 33,USP33)在乳腺癌细胞糖酵解过程中的调控作用和机制。方法 RT-qPCR和Western blot检测32例乳腺癌患者肿瘤组织和邻近非肿瘤组织中USP33的表达情况。RT-qPCR和Western blot检测正常乳腺上皮细胞MCF-10A，人乳腺癌细胞系MDA-MB-23、SKBR3、BT-474和MCF-7中USP33的表达。从乳腺癌细胞中筛选出USP33表达最高的MCF-7细胞，并转染干扰RNA，分为control组、si-NC组和si-USP33组。使用c-Myc过表达载体与USP33 siRNA共转染MCF-7细胞，分为control组、si-USP33组、pcDNA3.1-c-Myc组和si-USP33+pcDNA3.1-c-Myc组。CCK-8、划痕实验和Transwell实验分别检测MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭能力。试剂盒检测细胞中乳酸含量、ATP水平及葡萄糖摄取水平。Western blot检测细胞糖酵解相关蛋白的表达，包括葡萄糖转运体（glucose transporter type 1, GLUT1）、丙酮酸激酶M2(pyruvate kinase type M2, PKM2)和c-Myc。结果与邻近非肿瘤组织相比，乳腺癌肿瘤组织中USP33 mRNA和蛋白表达水平显著升高（P<0.05）。与MCF-10A细胞相比，人乳腺癌细胞系MDA-MB-23、SKBR3、BT-474和MCF-7中USP33 mRNA和蛋白表达显著上调（P<0.05）。与si-NC组相比，si-USP33组MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭能力降低（P<0.05）。与si-NC组相比，si-USP33组MCF-7细胞中乳酸和ATP的水平显著降低（P<0.05），细胞对葡萄糖的摄取显著减少（P<0.05），糖酵解相关蛋白GLUT1和PKM2的表达水平显著降低（P<0.05）。与si-NC组相比，si-USP33组c-Myc的蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。与si-USP33组相比，si-USP33+pcDNA3.1-c-Myc组糖酵解蛋白的表达水平显著升高（P<0.05）。结论干扰USP33可抑制MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭，并通过调控c-Myc的表达参与乳腺癌细胞的糖酵解进程，进而抑制乳腺癌的进展。