miR-802通过Fzd5-Creb1-Sox9信号轴调控小鼠胰腺祖细胞增殖及分化

摘要

目的 探讨miR-802在小鼠胰腺祖细胞（PPCs）干性维持及增殖调控中的具体作用及其潜在机制。方法 采用基于基质胶和甲基纤维素的三维半固体培养体系，从小鼠胰腺导管组织中筛选并培养PPCs，并通过慢病毒介导的miR-802过表达和敲减策略，系统研究其生物学效应。通过免疫荧光检测PPCs干性基因Pdx1及增殖标志Ki67的表达水平，采用流式细胞术分析CD133阳性细胞比例，并运用荧光定量PCR检测干性、增殖及内分泌分化相关基因（Pdx1、Ki67、CD133、Ins1、Ins2、Ngn3、NeuroD1）的表达情况。此外，采用Western blot检测Fzd5、磷酸化Creb1(p-Creb1)、Creb1及Sox9蛋白的表达水平。结果 敲减miR-802可显著促进PPCs的单克隆集落形成能力（P<0.01），增加集落直径（P<0.05），并提升细胞增殖能力（P<0.001），同时上调干性基因Pdx1和CD133的表达水平（P<0.001），并下调内分泌分化基因Ngn3和NeuroD1的表达水平（P<0.05）。相反，过表达miR-802则显著抑制单克隆集落形成能力（P<0.01），减小集落直径（P<0.05），抑制细胞增殖能力（P<0.01），抑制干性基因Pdx1和CD133表达（P<0.01），并促进内分泌分化基因Ins1、Ins2、Ngn3和NeuroD的表达（P<0.01）。此外，在miR-802敲除小鼠胰腺组织中，CD133/Ki67双阳性细胞比例明显增加（P<0.001）。进一步研究表明，敲减miR-802可上调Fzd5表达（P<0.05），促进Creb1磷酸化水平（P<0.01），并促进Sox9表达（P<0.001）；过表达miR-802则下调Fzd5表达（P<0.001），抑制Creb1磷酸化水平（P<0.001），并抑制Sox9表达（P<0.001）。结论 miR-802可通过调控Fzd5-Creb1-Sox9信号轴，促进PPCs增殖和干性基因表达并抑制内分泌分化基因表达，从而调控PPCs的增殖及分化平衡。

关键词

miR-802 / 胰腺祖细胞 / 细胞干性 / Fzd5 / Sox9 / Creb1