抗Claudin18.2单克隆抗体ADCP生物学活性测定方法的建立

摘要

目的 建立抗Claudin18.2单抗（mAb）的抗体依赖性细胞吞噬作用（ADCP）生物学活性检测方法。方法 以Jurkat/NFAT/CD32a-FcεRIγ转基因细胞系作为效应细胞，HEK293T-Claudin18.2细胞系作为靶细胞，通过萤光素酶检测系统(OneGlo^TM Luciferase Assay System)检测抗Claudin18.2单抗的ADCP生物学活性，并进行实验参数优化与方法学验证。结果 抗Claudin18.2单抗在该报告基因法中存在量效关系，且符合四参数方程：y=（A-D）/[1+（x/C）^B]+D。方法经多个实验参数筛选和优化，确定抗体工作浓度为0.02～200 000 ng/mL，靶细胞和效应细胞的接种量均为每孔5×10～4个，诱导时间为6 h。该方法具有良好的专属性；5个不同稀释组回收率样本经3次检测，相对效价分别为（48.90±2.36）%、（71.87±2.62）%、（99.64±2.12）%、（135.42±1.12）%和（151.16±6.91）%；回收率为96%～108%,RSD均小于6%，线性检测范围为50%～150%。结论 本研究成功建立基于报告基因的抗Claudin18.2单抗ADCP生物学活性测定方法，该方法具有良好的专属性、重复性和准确性，可作为抗Claudin18.2单抗ADCP生物学活性的评价方法。

关键词

抗Claudin18.2单抗 / 抗体依赖性细胞吞噬作用 / 生物学活性 / 转基因细胞 / 报告基因 / 优化 / 验证