miR-508-3p靶向CLEC1B基因抑制肝癌细胞增殖及侵袭

摘要

目的 探究微小RNA-508-3p（miR-508-3p）调控肝癌细胞增殖及侵袭的相关分子机制。方法 实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测本院30例有明确病理诊断的肝癌及对应的癌旁正常组织中miR-508-3p及C型凝集素结构域家族1成员B（CLEC1B）基因表达量。qRT-PCR及Western blot检测人正常肝细胞LO2及肝癌细胞Huh7、Hep3B、HepG2中miR-508-3p及CLEC1B表达差异。人肝癌细胞HepG2分为：control组、NC-mimics组、miR-508-3p mimics组、miR-508-3p mimics+si-NC组和miR-508-3p mimics+si-CLEC1B组，克隆形成实验及Transwell实验分别检测各组细胞增殖及侵袭能力，Western blot检测Hedgehog信号通路相关蛋白（Shh、Gli1、Ptch1）表达。Targetscan生物信息学网站预测miR-508-3p下游靶基因，双荧光素酶实验检测miR-508-3p与靶基因CLEC1B相关性。结果 与癌旁正常组织相比，肝癌组织中miR-508-3p基因表达量和CLEC1B基因表达量均明显降低（P<0.05），且肝癌组织中miR-508-3p和CLEC1B表达呈正相关（R²=0.746 2,P<0.001）。与control组及NC-mimics组相比，miR-508-3p mimics组HepG2细胞增殖及侵袭能力显著降低（P<0.05）,Hedgehog信号通路中Shh、Gli1、Ptch1蛋白表达减少（P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验证明CLEC1B是miR-508-3p的靶标。回复实验结果显示，与miR-508-3p mi-mics+si-NC组相比，miR-508-3p mimics+si-CLEC1B组细胞增殖及侵袭能力均显著提升（P<0.05），并且Shh、Gli1、Ptch1蛋白表达量升高（P<0.05）。结论 过表达miR-508-3p可靶向提高CLEC1B表达抑制Hedgehog通路蛋白，进而抑制HepG2细胞增殖及侵袭。

关键词

miR-508-3p / CLEC1B / 肝癌 / Hedgehog信号通路 / 增殖 / 侵袭