瑞马唑仑联合七氟醚对胃癌细胞转移的抑制作用及机制

摘要

目的 探讨瑞马唑仑（Rem）联合七氟醚（Sev）诱导肿瘤相关巨噬细胞（TAM）极化对胃癌细胞转移的调控作用及机制。方法 在THP-1细胞中加入终浓度为320 ng/mL的佛波酯刺激12 h为M0型TAM(M0-TAM)，然后，加入佛波酯（100 ng/mL）+IL-4(20 ng/mL)+IL-13(20 ng/mL)刺激48 h，诱导为M2型TAM(M2-TAM)。将人胃癌HGC-27细胞随机分为对照组、Rem组、Sev组和Rem+Sev组。收集各组HGC-27细胞，利用Transwell共培养体系，分别与M0-TAM或M2-TAM建立上下双层细胞共培养体系。采用集落形成实验检测细胞增殖，Transwell实验检测细胞迁移和侵袭；流式细胞术检测巨噬细胞极化；ELISA法检测共培养体系上清液中转化生长因子-β(TGF-β)、肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-6和IL-1β含量；Western blot检测各组共培养体系巨噬细胞极化因子精氨酸酶（Arg）-1和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）,HGC-27细胞中上皮-间充质转化（EMT）相关蛋白E-钙粘连蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、锌指结构E-box-结合同源框1(ZEB1)、扭曲因子（Twist）以及smad通路相关蛋白磷酸化SMDA家族成员2(p-smad2)、磷酸化SMDA家族成员3(p-smad3)和SMDA家族成员2/3(smad2/3)的表达。结果与Sev组相比，Rem+Sev组胃癌细胞的集落形成数和迁移、侵袭细胞数显著降低（P<0.05）。在M0-TAM和HGC-27共培养体系中，与Sev组相比，Rem+Sev组巨噬细胞中Arg-1表达和上清液中IL-10含量降低（P<0.05）,iNOS表达、TNF-α和IL-1β含量增多（P<0.05）。在M2-TAM与HGC-27共培养体系中，与Sev组比较，Rem+Sev组HGC-27细胞集落形成数和迁移、侵袭细胞数减少（P<0.05）,E-cadherin表达升高（P<0.05）,Vimentin、ZEB1和Twist表达降低（P<0.05）,TGF-β含量及p-smad2和p-smad3表达升高（P<0.05）。结论 Rem联合Sev可能通过促使TAM向M2型极化，抑制胃癌细胞中TGF-β/smad信号通路介导的EMT进程，从而控制胃癌细胞的增殖、侵袭和转移。

关键词

瑞马唑仑 / 七氟醚 / 肿瘤相关巨噬细胞 / 胃癌 / 上皮-间充质转化 / TGF-β/smad信号通路