SALL4对宫颈癌细胞顺铂耐药性的影响及其机制

摘要

目的 探讨婆罗双树样基因4（spalt-like transcription factor 4,SALL4）对宫颈癌细胞顺铂耐药性的影响并探讨其可能分子机制。方法 构建SALL4过表达质粒pCAG-IRES2-AcGFP1-Neo-SALL4，分别将空质粒pCAG-IRES2-AcGFP1-Neo（对照）和SALL4过表达质粒转染至HeLa和SiHa细胞，通过新霉素（G418）筛选稳定过表达SALL4的HeLa和SiHa细胞株。采用浓度梯度递增法建立HeLa和SiHa细胞的顺铂（cisplatin,DDP）耐药细胞株HeLa-DDP和SiHa-DDP。过表达SALL4组和对照组宫颈癌细胞加入不同浓度的顺铂（3,6,12,24,48μg/mL），培养48 h，采用MTT法计算顺铂半抑制浓度(IC₅₀)。过表达SALL4组和对照组宫颈癌细胞加入浓度为5μg/mL的顺铂，培养不同时间（24,48,72 h），采用MTT法计算细胞活率。应用qRT-PCR和Western blot法分别检测过表达SALL4细胞及顺铂耐药细胞中SALL4、ABCG2和MDR1的mRNA和蛋白表达水平。结果干预48 h，与对照组相比，过表达SALL4组不同浓度顺铂作用下宫颈癌细胞存活率明显升高，顺铂半抑制浓度(IC₅₀)显著升高（P<0.05）。同一浓度顺铂作用下，过表达SALL4组宫颈癌细胞培养48,72 h细胞存活率明显高于对照组（P<0.05）。与对照组比较，过表达SALL4组宫颈癌细胞中ABCG2和MDR1的mRNA和蛋白表达水平均显著升高（P<0.05）。顺铂耐药细胞株HeLaDDP和SiHa-DDP细胞中SALL4、ABCG2和MDR1的mRNA和蛋白表达水平均显著高于亲本细胞（P<0.05）。结论 过表达SALL4诱导人宫颈癌细胞对顺铂的耐药性，其作用机制可能与SALL4调控细胞耐药相关基因ABCG2和MDR1相关。

关键词

宫颈癌 / SALL4 / 基因过表达 / 顺铂 / 耐药性 / ABCG2 / MDR1