抗新冠病毒变异株JN.1刺突S蛋白单链抗体库的构建

摘要

目的 构建抗新冠病毒变异株JN.1刺突S蛋白的单链抗体库。方法 新冠病毒变异株刺突S蛋白抗原免疫Balb/c小鼠，提取脾脏RNA,PCR扩增出单链抗体的重链可变区（VH）和轻链可变区（VL），重叠延伸PCR构建scFv基因，将其插入噬菌体载体pCANTAB5E构建重组质粒，转入E.coli TG1感受态细胞，建立噬菌体展示pCANTAB5E-scFv抗体库。经培养获得初级噬菌体抗体库并测定其库容，随机挑选出单克隆抗体库进行PCR鉴定，进行多轮扩增与淘选，选择抗原亲和力最强的克隆进行测序分析和ELISA鉴定。结果 经琼脂糖电泳发现在250～500 bp之间出现目的条带，VH和VL片段样本长度分别为360 bp和339 bp，与预期长度相符；重叠延伸PCR构建scFv长度与预期片段792 bp大小相符。菌落PCR扩增鉴定重组率为90%，初级噬菌体抗体库库容为5×10¹² cfu，经过4轮筛选富集后抗体库库容为2×10^-6 cfu。重组质粒测序结果显示，scFv大小为792 bp，共编码264个氨基酸，通过VBASE2数据库分析抗新冠病毒变异株JN.1刺突S蛋白单链抗体VH和VL基因序列都存在3个互补决定区（CDR）和4个骨架区（FR）。经ELISA检测后，筛选出3株阳性克隆噬菌体。结论 本研究成功制备新冠病毒变异株JN.1刺突S蛋白单链抗体库，为进一步研究感染新冠病毒变异株JN.1的诊断和靶向生物治疗奠定基础。

关键词

JN.1变异株 / 刺突蛋白(S蛋白) / 单链抗体(scFv) / 抗体库构建 / 噬菌体展示技术 / 高通量筛选 / 中和抗体