酸枣仁汤对GAD65相关癫痫的治疗效果

摘要

目的 探讨酸枣仁汤对谷氨酸脱羧酶65(GAD65)相关癫痫的抗癫痫作用及其机制。方法 取70只小鼠，10只作为对照组，60只作为造模组。造模组小鼠经尾静脉注射鼠源GAD65单克隆抗体（100μg/mL,0.1 mL/只），连续3 d。之后，每日腹腔注射戊四氮（PTZ,10 mg/kg），连续7 d，诱导癫痫发作并评价癫痫发作潜伏期与等级。取模型制备成功小鼠，随机分为模型组、阳性药组（苯妥英钠，100 mg/kg）、酸枣仁汤低、中、高剂量组（10,25,50 g/kg），每组10只。阳性药组以10 mg/mL苯妥英钠溶液灌胃；酸枣仁汤低、中、高剂量组小鼠分别以生药浓度为1,2.5,5 kg/L的酸枣仁汤灌胃；模型组和对照组以等体积生理盐水灌胃；给药28 d。给药第1,7,14,21,28天，通过Racine分级标准评估治疗效果。末次行为学观察结束，将小鼠颈椎脱臼处死，取颞叶皮层组织。通过试剂盒检测大脑颞叶皮层中γ-氨基丁酸（GABA）、谷氨酸（Glu）、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与IL-10含量；通过Western blot检测GAD65、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、磷酸化核因子κB(pNF-κB)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)与Bcl-2相关X(Bax)蛋白表达。结果 与对照组相比，造模组小鼠均出现3级以上的癫痫症状。与模型组相比，阳性药组小鼠自给药第1天，癫痫发作潜伏期明显延长（P<0.05），发作等级明显降低（P<0.05）；酸枣仁汤中、高剂量组自给药第7天，癫痫发作潜伏期明显延长（P<0.05），发作等级明显降低（P<0.05），而酸枣仁汤低剂量组给药期，癫痫发作潜伏期和等级都未见明显变化。此外，与对照组相比，模型组小鼠大脑颞叶皮层中GABA含量和IL-10减少（P<0.05）,Glu含量和IL-6、TNF-α水平增加（P<0.05）,GAD65、Bcl-2蛋白表达明显减少（P<0.05）,NLRP3、p-NF-κB、Bax蛋白表达明显增加（P<0.05）。与模型组相比，酸枣仁汤中、高剂量组小鼠大脑颞叶皮层中GABA和IL-10含量明显增加（P<0.05）,Glu和IL-6、TNF-α含量明显减少（P<0.05）,GAD65、Bcl-2蛋白表达明显增加（P<0.05）,NLRP3、p-NF-κB、Bax蛋白表达明显减少（P<0.05）。结论 酸枣仁汤对癫痫存在明显的治疗作用，其机制可能与提高GAD65蛋白表达、促进Glu向GABA转化有关，也可能与抑制炎症反应相关。

关键词

酸枣仁汤 / 癫痫 / GAD-65 / γ-氨基丁酸 / 谷氨酸 / 炎症反应