基于外泌体蛋白组学探讨辅舒良治疗大鼠变应性鼻炎的作用机制

摘要

目的 运用外泌体蛋白组学的方法研究丙酸氟替卡松鼻喷雾剂（辅舒良）治疗大鼠变应性鼻炎的机制。方法 将SD大鼠随机分为空白组、模型组和鼻喷激素组（治疗组），每组10只。除空白组外，其余各组大鼠腹腔注射混合液1 mL[含0.3 mg OVA和30 mg Al（OH）₃]，隔日致敏1次，连续7次进行全身致敏，第15～21天，予大鼠5%OVA每侧鼻腔各0.05 mL滴鼻，每日一次，连续7次进行鼻腔激发建立大鼠变应性鼻炎模型。第22天开始，治疗组使用辅舒良滴鼻进行干预，每日一次，连续21 d。全部干预措施结束后3 d取大鼠腹主动脉血和鼻黏膜组织。通过HE染色观察鼻黏膜组织病理学变化，免疫组化检测鼻黏膜IL-4、IFN-γ水平。采用超速离心法提取大鼠外周血血浆中的外泌体，透射电镜、粒径分析（NTA）检测外泌体形态，根据P<0.05且|log₂（Fold Change）|>1.5倍的标准筛选大鼠血浆外泌体中显著差异表达的蛋白，并进行GO、KEGG富集分析和PPI分析。结果与模型组相比，治疗组大鼠鼻黏膜水肿和炎细胞浸润减轻，鼻黏膜IL-4表达降低（P<0.05），鼻黏膜IFN-γ表达增加（P<0.05）。蛋白组学发现，相对于空白组，模型组共有92个差异蛋白，其中上调蛋白41个，下调蛋白51个；相对于模型组，治疗组共有475个差异蛋白，其中上调蛋白325个，下调蛋白150个。GO富集分析发现，治疗组与模型组所调控的差异蛋白参与了生物过程、分子功能和细胞组分，主要富集于蛋白激活级联反应、丝氨酸型内肽酶抑制剂活性、细胞外间隙等。KEGG分析显示，治疗组与模型组所调控的差异蛋白涉及多条信号通路，其中在补体和凝血级联信号通路中参与度最高。对治疗组与模型组所调控的差异蛋白进行PPI分析发现F2、Plg、Alb、Serpinc1、Serping1、Fga共6种差异蛋白位于功能网络中心，且多数蛋白均属于补体和凝血级联信号通路。将模型组与空白组、治疗组与模型组间的差异蛋白同时进行比较，得出与补体和凝血途径相关的蛋白为外泌体C4b和C1qc。结论 丙酸氟替卡松鼻喷雾剂（辅舒良）可能通过调节外泌体蛋白C4b和C1qc，改变凝血和纤溶系统组分，影响补体和凝血级联信号通路，改善大鼠变应性鼻炎的炎症反应。

关键词

变应性鼻炎 / 外泌体 / 蛋白组学 / 丙酸氟替卡松鼻喷雾剂 / 补体和凝血级联信号通路 / C4b / C1qc