桃叶珊瑚苷上调AKT/GSK⁃3β/Nrf2信号通路减轻脑缺血再灌注损伤

Aucubin alleviates cerebral ischemia⁃reperfusion injury by upregulating AKT/GSK⁃3β/Nrf2 signaling pathway

摘要

目的 探讨桃叶珊瑚苷（Aucubin，AU）在脑缺血再灌注（CIR）损伤中的保护作用及其潜在的调控机制。 方法 将SD大鼠随机分为4组：对照组、CIR组、CIR+AU 10 mg/kg 组以及CIR+AU 20 mg/kg组。通过中脑动脉栓塞法（MCAO）构建CIR模型。CIR+AU 10 mg/kg组和CIR+AU 20 mg/kg组在造模开始前腹腔注射相应剂量AU连续5 d，建模后继续给予相应药物2 d。通过氯化三苯四氮唑（TTC）染色法评估脑梗死面积；采用苏木精-伊红（HE）染色观察脑组织损伤程度；采用TUNEL实验检测细胞凋亡；利用相关试剂盒检测活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）的水平；采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测炎症因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）和IL-1β的水平；采用Western blot法检测AKT、糖原合酶激酶3β（GSK-3β）、核因子E2相关因子2（Nrf2）、血红素加氧酶1（HO-1）和醌氧化还原酶1（NQO1）蛋白的表达。 结果 与对照组比较，CIR组脑梗死面积、脑组织损伤程度、脑组织凋亡、氧化应激及炎症水平显著升高（P<0.05）；与CIR组比较，CIR+AU 10 mg/kg组和CIR+AU 20 mg/kg组在脑梗死面积、脑组织损伤、凋亡、氧化应激及炎症水平方面均显著改善（P<0.05）。与对照组比较，CIR组p-AKT和p-GSK-3β水平显著下降（P<0.05），Nrf2、HO-1和NQO1蛋白表达显著升高（P<0.05）；与CIR组比较，CIR+AU 10 mg/kg组和CIR+AU 20 mg/kg组p-AKT、p-GSK-3β、Nrf2、HO-1和NQO1蛋白表达显著增加（P<0.05）。此外，与CIR+AU 10 mg/kg组比较，CIR+AU 20 mg/kg组在各项指标改善中表现出更显著的效果（P<0.05）。 结论 AU对CIR损伤具有显著的保护作用，其机制可能与上调AKT/GSK-3β/Nrf2信号通路密切相关。

Abstract

Objective To investigate the protective effects of Aucubin（AU） against cerebral ischemia-reperfusion（CIR） injury and elucidate its potential regulatory mechanisms. Methods Sprague-Dawley（SD） rats were randomly divided into four groups： control group， CIR group， CIR+AU 10 mg/kg group， and CIR+AU 20 mg/kg group. The CIR model was established using the middle cerebral artery occlusion（MCAO） method. The rats were intraperitoneally injected with the corresponding dose of AU daily for five consecutive days before modeling， and two days after modeling in CIR+AU 10 mg/kg group and CIR+AU 20 mg/kg group. The infarct volume was evaluated using triphenyltetrazolium chloride（TTC） staining， and the brain tissue damage was assessed by hematoxylin-eosin（HE） staining. Cell apoptosis was detected by TUNEL assay. Levels of reactive oxygen species（ROS）， malondialdehyde（MDA）， and superoxide dismutase（SOD） were measured using specific assay kits. Levels of inflammatory cytokines including tumor necrosis factor-alpha（TNF-α）， interleukin-6（IL-6）， and IL-1β were quantified by ELISA. Protein expressions of AKT， glycogen synthase kinase-3 beta（GSK-3β）， nuclear factor erythroid 2-related factor 2（Nrf2）， heme oxygenase-1（HO-1）， and quinone oxidoreductase 1（NQO-1） were determined by Western blot. Results Compared with control group， the cerebral infarct area， the brain tissue damage， the neuronal apoptosis， the oxidative stress， and inflammation levels significantly increased in CIR group（P<0.05）. Compared with CIR group， the cerebral infarct area， the brain tissue damage， the apoptosis， the oxidative stress， and inflammation levels were significantly improved in CIR+AU 10 mg/kg group and CIR+AU 20 mg/kg group（P<0.05）. Compared with control group， the levels of p-AKT and p-GSK-3β significantly decreased in CIR group（P<0.05）， and the expressions of Nrf2， HO-1， and NQO1 proteins significantly increased（P<0.05）. Compared with CIR group， p-AKT， p-GSK-3β， Nrf2， HO-1， and NQO1 protein expressions significantly increased in both CIR+AU 10 mg/kg group and CIR+AU 20 mg/kg group（P<0.05）. All above indicators showed more significant effect in CIR+AU 20 mg/kg group than in CIR+AU 10 mg/kg group（P<0.05）. Conclusion AU can exert significant protective effects against CIR injury， which may be closely related to the upregulation of AKT/GSK-3β/Nrf2 signaling pathway.

Graphical abstract

关键词

桃叶珊瑚苷 / 脑缺血再灌注损伤 / 氧化应激 / 炎症反应 / Nrf2 / AKT / GSK-3β

Key words

Aucubin / cerebral ischemia-reperfusion injury / oxidative stress / inflammation / Nrf2 / AKT / GSK-3β

缺血性卒中是全球致死致残的主要脑血管疾病，其病理核心为脑血管阻塞引发的神经元不可逆损伤^［1］。尽管早期血管再通，如静脉溶栓，可有效恢复缺血区血流，但再灌注过程常伴随继发性脑损伤，即脑缺血再灌注（cerebral ischemia-reperfusion， CIRI）损伤，其机制涉及氧化应激、炎症级联反应及细胞死亡通路异常激活^［2］。这一矛盾现象严重限制了缺血性卒中治疗方案的临床获益。近年来，基于传统中药活性单体的神经保护剂研发逐渐成为该领域的研究热点^［3，4］。中药单体化合物因其多靶点调控特性，在拮抗CIR损伤复杂病理机制方面展现出独特优势。因此，筛选具有明确神经保护效力的中药来源小分子化合物，并阐明其作用靶点与信号通路，对开发新型卒中治疗策略具有重要科学意义及临床转化价值。

桃叶珊瑚苷（Aucubin， AU）是一种天然环烯醚萜苷，广泛存在于杜仲等传统中药材中，作为一种高活性化合物，展现出多种药理作用，包括抗炎、抗凋亡和抗氧化等^［5，6］。动物模型实验表明，AU在多种疾病的治疗中具有显著的保护作用，如骨质疏松、动脉粥样硬化、肺纤维化及神经退行性疾病，体现出良好的应用前景^［7-10］。尤其值得关注的是，AU可通过抑制氧化应激、细胞凋亡和炎症，有效保护因缺血再灌注所导致的器官组织损伤，包括肝脏、心脏以及后肢等，展现出广阔的临床应用潜力^［11-13］。

本课题组前期细胞实验研究发现，AU对氧糖剥夺后再复氧诱导的神经元损伤具有显著的保护作用^［14］。该研究暗示其在CIR损伤中可能具有潜在的保护效益，值得进一步深入研究。在此基础上，本研究通过动物模型实验系统探讨AU对CIR损伤的调控作用，并揭示其可能的分子机制，以期为AU在CIR损伤治疗中的应用提供更为坚实的科学理论依据。

1 材料和方法

1.1 材料与试剂

桃叶珊瑚苷（分析标准品，HPLC≥98%，货号：B21238）购自上海源叶生物科技有限公司；SD大鼠购自西安交通大学实验动物中心（SCXK（陕）2023-002）；TTC染液和HE染色试剂盒购自北京索莱宝公司；TUNEL凋亡检测试剂盒购自上海翌圣生物科技股份有限公司；ROS试剂盒、Nrf2抗体、HO-1和NQO-1抗体购自英国Abcam公司；MDA和SOD试剂盒购自上海碧云天生物公司；TNF-α、IL-6和IL-1β ELISA试剂盒购自武汉伊莱瑞特生物公司；蛋白提取裂解液、蛋白定量试剂盒和ECL化学发光底物检测试剂盒购自陕西中晖赫彩生物医药公司；AKT抗体、p-AKT抗体、GSK-3β抗体和p-GSK-3β抗体购自美国Cell Signaling Technology公司；β-Tubulin抗体、Lamin B1抗体以及HRP标记的二抗购自武汉三鹰生物公司。

1.2 实验分组和模型构建

参考文献报道的AU使用剂量^［15-17］，并结合本课题的预实验结果，本研究将AU剂量设定为低剂量组10 mg/kg和高剂量组20 mg/kg。预实验中，通过HE染色法评估AU对大鼠各主要器官的毒性作用，结果显示AU对各器官未见明显毒副作用，提示AU在本研究中的应用具有良好的安全性。将48只SD大鼠随机分为4组（n=12）：对照组、CIR组、CIR+AU 10 mg/kg组及CIR+AU 20 mg/kg组。CIR模型的构建采用改良的MCAO法。大鼠通过2%异氟醚麻醉后固定于手术台上，沿颈部正中切开，分离并标识左侧颈总动脉、外颈动脉及内颈动脉。通过外颈动脉插入尼龙线至内颈动脉尖部，阻断大脑中动脉血流，以诱导缺血过程。60 min后，拔出尼龙线以恢复血流，模拟再灌注过程。右侧大脑中动脉的血流通过多普勒分析实时监测，脑血流在缺血期间下降超过85%被视为建模成功的标志。对照组实施假手术，仅暴露血管而不阻断血流。在药物干预组中，造模开始前连续5 d分别通过腹腔注射10 mg/kg或20 mg/kg的AU进行预处理，建模后继续注射2 d以完成干预。再灌注48 h后，通过腹腔注射150 mg/kg戊巴比妥钠实施安乐死，并采集脑组织以进行后续分析。动物实验经延安大学医学院生物医学伦理委员会审核并批准（批准号：2022134），所有实验操作均严格遵循该委员会制定的动物实验管理规范和相关伦理准则。

1.3 TTC染色法检测脑梗死体积

用冰冷的生理盐水清洗脑组织后，小心去除脑膜和血管，将完整脑组织放入冰冻切片机冷藏室内预冷约20 min以轻度硬化。随后，将脑组织冠状位切割为厚度为2 mm的5个连续切片。将切片置于37 ℃的1% TTC溶液中，遮光孵育30 min。染色结束后，将切片转移至4%多聚甲醛中固定30 min，再用生理盐水冲洗后拍照记录。TTC染色中，正常脑组织为红色，而梗死脑组织呈白色。通过ImageJ软件对照片进行分析。将全部切片的梗死体积之和除以整个大脑的总体积，计算梗死百分比用以评估脑梗死程度。

1.4 HE染色法检测脑组织病理学变化

将清洗后的完整脑组织固定于4%多聚甲醛中24 h。固定后的脑组织进行脱水、透明、浸蜡，并制成石蜡包埋块。采用连续切片机将石蜡包埋的脑组织切成厚度为4 μm的连续切片并贴附于载玻片上，用以进行后续病理染色分析。切片经二甲苯脱蜡后，依次经过梯度乙醇（从100%至70%）水化，然后进行HE染色。首先，将切片浸入苏木精溶液中染色5 min，用自来水冲洗至蓝色背景清晰为止，再经1%盐酸-乙醇分化几秒后水洗，以获得良好的细胞核染色效果。随后，切片置于伊红溶液中染色2 min，以染色细胞质和胞外基质。染色结束后，切片再次经梯度乙醇脱水并二甲苯透明，最后用中性树胶封片。染色完成后的切片在光学显微镜下观察和拍照，评估病理学变化。

1.5 TUNEL法检测脑组织细胞凋亡水平

石蜡切片经脱蜡和梯度水化处理后，用蛋白酶K在37 ℃孵育20 min以提高组织通透性，随后使用PBS轻柔冲洗。按照试剂盒说明书配制TUNEL工作液，取适量加至载玻片上的组织切片后，覆盖盖玻片并置于37 ℃湿盒中避光孵育1 h。孵育完毕后，使用PBS清洗，并滴加含DAPI的抗荧光衰减封片剂覆盖和封片。完成染色的切片在荧光显微镜下观察，以绿色荧光检测标记的凋亡细胞。随机选择多个高倍视野，对凋亡阳性细胞数量进行统计，并计算凋亡细胞比例（TUNEL阳性细胞数/总细胞数×100%）。

1.6 脑组织氧化应激水平检测

脑组织中的ROS水平通过ROS检测试剂盒进行检测。首先，将脑组织在PBS中充分匀浆，随后通过离心分离收集上清液。每孔加入50 µL上清液于96孔板中，接着向每孔分别加入50 µL催化剂和100 µL DCFH溶液。混合后，实验板避光处理，并在室温下孵育45 min。最后，通过荧光酶标仪测量荧光强度，以确定ROS的水平。此外，通过商品化试剂盒，按照说明书操作，分别测定脑组织中的MDA和SOD水平。

1.7 ELISA法检测脑组织炎症因子表达水平

将脑组织称重并按照组织质量与PBS体积比1∶9进行匀浆处理。匀浆过程中使用超声波破碎仪进行细胞破碎以释放细胞内成分。样本处理完成后，将匀浆液置于4 ℃条件下以12 000 r/min离心15 min，收集上清液备用，用于后续ELISA分析。将预处理好的样本上清液分别加入到预包被相应抗体的96孔板中，每孔加入50 µL，随后根据试剂盒提供的步骤依次添加抗体检测液和底物溶液。孵育结束后，加入终止液以阻止反应，并利用酶标仪在450 nm波长处测量吸光度值。通过建立标准曲线，计算样本中炎症因子的浓度水平。

1.8 Western blot检测AKT、GSK-3β、Nrf2、HO-1和NQO-1蛋白表达水平

取新鲜脑组织，加入预冷的RIPA裂解液（含PMSF及磷酸酶抑制剂）。使用超声波破碎仪在冰浴条件下超声处理脑组织，以充分裂解细胞并提取总蛋白。离心收集上清液，随后利用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白的浓度，并加入5×SDS加载缓冲液，充分混匀后煮沸5 min，使蛋白充分变性。样品加载于SDS-PAGE凝胶中进行电泳分离。电泳分离后，将蛋白转移至PVDF膜上。完成转膜后，用5%牛奶封闭液在室温下封闭PVDF膜1 h，降低非特异性结合。随后，PVDF膜分别孵育一抗（AKT抗体稀释度为1∶1 000，p-AKT抗体稀释度为1∶2 000，GSK-3β抗体稀释度为1∶1 000，p-GSK-3β抗体稀释度为1∶1 000，HO-1抗体稀释度为1∶2 000，NQO-1抗体稀释度为1∶5 000，Nrf2抗体稀释度为1∶1 000，β-Tubulin抗体稀释度为1∶10 000，Lamin B1抗体稀释度为1∶5 000），并置于4 ℃轻轻摇动孵育过夜。次日，用TBST洗膜3次，然后加入HRP标记的二抗（稀释度为1∶5 000），室温孵育1 h。再次用TBST洗膜后，通过化学发光底物显影检测蛋白条带，用凝胶成像系统拍摄条带图像。

1.9 数据统计分析

本研究的数据均采用GraphPad Prism 8软件进行统计分析。实验结果均以平均值±标准差（X±S）表示。对于多组之间的数据比较，采用单因素方差分析进行显著性检验，进一步进行Tukey检验用于组间两两比较。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 AU对CIR大鼠脑梗死面积的影响

TTC染色结果显示，与对照组比较，CIR组大鼠脑组织呈现大面积白色区域，提示出现严重的脑梗死；而与CIR组比较，CIR+AU 10 mg/kg组和CIR+AU 20 mg/kg组白色梗死面积显著减少（P<0.05，见图1）。另外，与CIR+AU 10 mg/kg组比较，CIR+AU 20 mg/kg组白色梗死面积更少（P<0.05，见图1）。

2.2 AU对CIR大鼠脑组织病理损伤的影响

HE染色结果显示，与对照组比较，CIR组大鼠的脑组织中出现界限模糊的网状结构，组织间隙增宽，神经元大量缺失并伴随空泡化、核固缩等病理改变；而与CIR组比较，CIR+AU 10 mg/kg组和CIR+AU 20 mg/kg组大鼠脑组织结构损伤明显减轻，神经元排列较为整齐，细胞形态趋于完整，空泡样变性和核固缩现象减少，组织间隙较为紧密（见图2）。另外，与CIR+AU 10 mg/kg 组比较，CIR+AU 20 mg/kg组脑组织损伤的改善作用更为显著（见图2）。

2.3 AU对CIR大鼠脑神经元凋亡的影响

TUNEL染色结果表明，与对照组比较，CIR组大鼠脑组织中凋亡细胞比例显著升高（P<0.001）；而与CIR组比较，CIR+AU 10 mg/kg组和CIR+AU 20 mg/kg组大鼠脑组织中凋亡细胞比例均显著降低（P<0.05，见图3）。此外，与CIR+AU 10 mg/kg组比较，CIR+AU 20 mg/kg 组大鼠脑组织中凋亡细胞比例进一步降低（P<0.05，见图3）。

2.4 AU对CIR大鼠脑组织氧化应激水平的影响

与对照组比较，CIR组大鼠脑组织中的ROS和MDA水平均显著升高（P<0.01），而SOD水平显著降低（P<0.01）；与CIR组比较，CIR+AU 10 mg/kg组和CIR+AU 20 mg/kg组大鼠脑组织中ROS和MDA水平均显著下降（P<0.05），而SOD水平显著升高（P<0.05，见图4）。此外，与CIR+AU 10 mg/kg组比较，CIR+AU 20 mg/kg组ROS和MDA水平更低（P<0.05），SOD水平更高（P<0.05，见图4）。

2.5 AU对CIR大鼠脑组织炎症反应的影响

与对照组比较，CIR组TNF-α、IL-6和IL-1β的表达水平均显著升高（P<0.01）；与CIR组比较，CIR+AU 10 mg/kg组和CIR+AU 20 mg/kg组TNF-α、IL-6和IL-1β的表达水平均显著降低（P<0.05，见图5）。此外，与CIR+AU 10 mg/kg组比较，CIR+AU 20 mg/kg组TNF-α、IL-6和IL-1β的表达水平进一步降低（P<0.05，见图5）。

2.6 AU对CIR大鼠脑组织AKT和GSK-3β的磷酸化水平的影响

Western blot分析显示，与对照组比较，CIR组大鼠脑组织中AKT和GSK-3β的磷酸化水平均显著降低（P<0.01）；与CIR组比较，CIR+AU 10 mg/kg组和CIR+AU 20 mg/kg组大鼠脑组织中AKT和GSK-3β的磷酸化水平均显著升高（P<0.05，见图6）。此外，与CIR+AU 10 mg/kg组比较，CIR+AU 20 mg/kg组AKT和GSK-3β的磷酸化水平进一步升高（P<0.05，见图6）。

2.7 AU对CIR大鼠脑组织Nrf2信号通路的影响

Western blot结果表明，与对照组比较，CIR组大鼠脑组织中细胞核内Nrf2的表达水平及其下游蛋白HO-1和NQO-1的表达水平均显著升高（P<0.05）；与CIR组比较，CIR+AU 10 mg/kg组和CIR+AU 20 mg/kg组大鼠脑组织中细胞核Nrf2以HO-1和NQO-1的表达水平均进一步升高（P<0.05，见图7）。此外，与CIR+AU 10 mg/kg组比较，CIR+AU 20 mg/kg组细胞核内Nrf2及HO-1和NQO-1的表达水平更高（P<0.05，见图7）。。

3 讨论

CIR损伤是导致脑卒中后功能障碍的主要病理机制，其治疗亟需有效的神经保护策略。凋亡、氧化应激及炎症反应是CIR损伤中神经元损害的核心环节。因此，开发能够协同抑制上述病理过程的新型活性分子具有重要临床意义。近年来，单体化合物在抗CIR损伤中的作用日益受到关注。本研究聚焦于单体化合物AU在CIR大鼠模型中的保护作用，系统探讨了其对脑梗死体积、组织病理学改变、神经元凋亡、氧化应激水平及炎症因子表达的影响。通过以上研究可以明确AU治疗CIR损伤的潜在价值，为新型治疗药物的研发提供实验依据和理论基础。

近年来多项动物实验显示，AU在缓解多种疾病进程方面具有显著效果，展现了良好的药用潜力^［18-20］。特别是缺血相关疾病中，AU的保护作用尤为突出。如在后肢缺血、肝脏及心肌缺血再灌注模型中，AU均表现出减少组织损伤、抑制细胞凋亡和减轻氧化应激的显著效果，提示其具有广泛的抗缺血损伤潜力^［11-13］。目前，关于AU在CIR损伤中的作用尚不完全明确。项目组在前期细胞实验中发现，AU显著缓解了氧糖剥夺诱导的神经元损伤，揭示其可能通过减轻细胞凋亡、改善氧化应激等途径发挥保护作用，由此初步提示AU在CIR损伤治疗中的潜力^［14］。基于这些前沿报道和前期发现，本研究通过动物实验系统地探讨了AU对CIR损伤的具体调控效果。结果显示，AU处理显著减少了CIR大鼠脑梗死面积，改善了脑组织病理损伤，展现出良好的体内保护作用。此外，AU在阿尔茨海默病、抑郁症和脊髓损伤等神经系统疾病模型中的保护作用也已被证实^{［10，21，22］}。这些研究结果与本实验在CIR模型中所观察到的AU的神经保护作用高度一致。

AU在多种疾病中的保护作用与其抗凋亡、抗氧化和抗炎活性密切相关^［5］。在CIR损伤中，神经元凋亡、氧化应激和炎症反应是导致脑组织损伤及功能障碍的主要因素。CIR引发的神经元大量死亡会造成脑组织的不可逆损伤；同时，缺血再灌注后释放的大量ROS导致氧化应激加剧，进一步损害神经元的代谢功能^{［23，24］}。此外，炎症因子的显著升高加速了脑组织的病理恶化，形成神经损伤恶性循环^［25］。针对上述病理过程，寻找能够调控神经元凋亡、氧化应激及炎症反应的治疗策略对于缺血性脑损伤的治疗具有重要意义。本实验发现AU能够显著降低CIR大鼠脑组织中神经元的凋亡水平。此外，AU处理显著减少了脑组织中的ROS及MDA水平，提高了具有抗氧化作用的酶SOD的活性。另外，AU显著降低脑组织中炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β的表达水平。提示AU具有抗凋亡、抗氧化和抗炎活性，这一发现与既往关于AU药理作用的研究报道高度一致。

AU因其独特的靶向分子调控机制在多种疾病研究中备受关注，尤其是其对Nrf2信号通路的调控作用。Nrf2作为细胞应对氧化应激的关键转录因子，在调控细胞凋亡、氧化应激和炎症反应方面发挥核心作用^［26］。研究表明，Nrf2不仅是抗氧化及抗炎反应的重要调控分子，同时也是治疗CIR的理想靶标^［27］。AU在疾病保护中的疗效也被认为与其对Nrf2信号通路的激活密切相关^{［17，28，29］}。基于此，我们重点探讨了AU对CIR条件下Nrf2信号通路的调控作用。研究结果表明，AU处理能够显著提高Nrf2在细胞核中的表达水平，并上调其下游抗氧化基因HO-1和NQO-1的蛋白表达，提示AU对Nrf2信号通路具有激活作用。这些结果与既往研究一致，进一步验证了AU对Nrf2信号通路的调控作用。此外，AKT/GSK-3β信号通路在脑缺血损伤中具有显著的保护作用，并与Nrf2信号通路的激活存在密切联系^［30］。本研究结果显示，AU处理显著提高了AKT和GSK-3β的磷酸化水平，表明该化合物能够激活AKT/GSK-3β通路。因此，AU可能通过激活AKT/GSK-3β通路，进而介导Nrf2信号通路的上调，从而产生抗凋亡、抗氧化和抗炎的综合保护效应。这一机制可能为其对CIR损伤发挥保护作用的重要分子基础，也是本研究在AU作用机制方面的一个重要发现。

本研究存在一定局限性，主要聚焦于脑组织水平的分子及病理变化，对AU在体内药代动力学特征、安全窗口和长期影响等尚缺乏深入探讨。此外，尽管本研究初步揭示了AKT/GSK-3β/Nrf2通路在AU发挥保护作用中的重要性，但其更广泛的信号通路及分子参与机制还需进一步阐明和验证。针对上述局限，后续研究应从以下几个方面进一步推进：一是扩展动物模型类型，验证AU在其他脑血管疾病模型、中枢神经系统疾病乃至临床样本中的普适性与有效性；二是系统评价AU的药代动力学特征、安全性及毒副作用，为临床转化研究提供依据；三是深入解析AU调控CIR损伤的分子机制，探索其与其他信号通路的交互作用及更多潜在靶点。

综上所述，本研究系统探讨了单体化合物AU对CIR损伤的保护作用及其潜在的分子机制，结果表明，AU能够显著减轻CIR诱导的脑梗死和组织病理损伤，并通过抑制神经元凋亡、改善氧化应激状态以及减轻炎症反应，发挥多层次的综合保护作用。此外，研究还提示AU的神经保护效应可能与其对AKT/GSK-3β/Nrf2信号通路的激活密切相关。本研究为AU在神经保护领域的应用提供了重要理论支持，并为CIR损伤的治疗提供了新的思路和实验依据。

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基金资助

陕西省重点研发计划项目(2024SF-YBXM-463)

咸阳市重点研发计划项目(L2022ZDYFSF076)