基于网络药理学和体外实验探讨罗汉果皂苷Ⅴ对肝细胞癌的作用机制

摘要

目的 基于网络药理学和体外实验探讨罗汉果皂苷Ⅴ（MⅤ）影响肝细胞癌（HCC）的作用机制。方法 通过网络药理学筛选MⅤ抗HCC的潜在作用靶点；通过STRING数据库构建潜在作用靶点蛋白-蛋白相互作用（PPI）网络，并通过Cytoscape筛选核心靶点；通过DAVID数据库对潜在作用靶点进行富集分析；通过AutoDock软件对MⅤ和核心靶点进行分子对接。人HCC细胞HepG2、Huh7细胞分别用不同浓度MⅤ（0～200μmol/L）处理，CCK-8法检测MⅤ对HepG2、Huh7细胞的IC₅₀。根据IC₅₀结果将HepG2、Huh7细胞分为对照组（0μmol/L MⅤ）和MⅤ组（HepG2细胞：30μmol/L MⅤ；Huh7细胞：20μmol/L MⅤ）。采用平板克隆实验检测HepG2、Huh7细胞增殖活性；流式细胞术检测HepG2、Huh7细胞凋亡和细胞周期；蛋白免疫印迹（Western blot）检测HepG2、Huh7细胞上皮-间充质转化（EMT）相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin的表达水平；定量反转录聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测HepG2、Huh7细胞NF-κB信号通路中相关基因TNF-α、IL-6、IL-1β、NF-κB1的mRNA表达水平。结果 获得MⅤ抗HCC潜在靶点162个，其中8个核心靶点，包括TNF、ALB、IL-6、IL-1β、STAT3、NF-κB1、CASP3、SRC；分子对接结果显示，MⅤ与8个核心靶点均有较高的亲和力。细胞实验结果显示，MⅤ对HepG2、Huh7细胞的IC₅₀分别为（33.22±1.39）μmol/L和（23.79±2.51）μmol/L。与对照组比较，MⅤ组HepG2和Huh7细胞的增殖活性降低（P<0.001）；凋亡比例增加（P<0.05）;G0/G1期细胞比例降低，G2/M期细胞比例增高（均P<0.001）。Western blot结果显示，与对照组比较，MⅤ组HepG2和Huh7细胞中E-cadherin蛋白表达增加，而N-cadherin和Vimentin蛋白表达减少（均P<0.05）;RT-qPCR结果显示，与对照组比较，MⅤ组HepG2和Huh7细胞NF-κB信号通路中相关基因TNF-α、IL-6、IL-1β、NF-κB1的mRNA表达水平均降低（均P<0.001）。结论 MⅤ可能通过靶向TNF-α、IL-6、IL-1β、NF-κB1等基因，抑制NF-κB信号通路活性，从而发挥抗HCC作用。

关键词

罗汉果皂苷Ⅴ / 肝细胞癌 / 网络药理学 / 分子对接 / 细胞实验 / NF-κB信号通路