黄芪甲苷通过调控自噬抑制肝星状细胞活化

摘要

目的 探讨黄芪甲苷（AS-Ⅳ）对肝星状细胞（HSCs）自噬和活化的影响及其机制。方法 体外培养HSC-T6细胞，采用血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)刺激HSC-T6细胞活化以建立肝纤维化（HF）模型。通过检测纤维化标志蛋白（α-SMA和α1-Collagen）的过表达来认定HF模型构建成功。将HSC-T6细胞分为5组：control组、HF组、HF+AS-Ⅳ20μmol/L组、HF+AS-Ⅳ30μmol/L组和HF+AS-Ⅳ40μmol/L组，筛选AS-Ⅳ干预的最佳浓度。为探讨AS-Ⅳ对HSC-T6细胞自噬水平的影响，将HSC-T6细胞分为：control组、HF组、HF+AS-Ⅳ（40μmol/L）组；为进一步探讨自噬激活对AS-Ⅳ抗纤维化作用的影响，将HSCT6细胞分为：control组、HF组、HF+AS-Ⅳ（40μmol/L）组、HF+AS-Ⅳ（40μmol/L）+雷帕霉素（RAPA）组。采用qRT-PCR检测炎症因子TNF-α、TGF-β1的mRNA表达水平，Western blot检测纤维化相关蛋白（α-SMA、α1-Collagen）及自噬相关蛋白（LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1）的表达。结果 与control组相比，HF组TNF-α和TGF-β1的mRNA水平、α-SMA和α1-Collagen表达均显著增加（P<0.001）。与HF组相比，HF+AS-Ⅳ组（20,30,40μmol/L）TNF-α和TGF-β1的mRNA水平均显著降低（P<0.001）,α-SMA和α1-Collagen蛋白的表达水平均显著下降（P<0.05），尤其40μmol/L时抑制作用最为显著（P<0.000 1）。与HF组相比，HF+AS-Ⅳ组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值和Beclin-1表达均显著降低（P<0.05）；与HF+AS-Ⅳ组相比，HF+AS-Ⅳ+RAPA组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、Beclin-1、α-SMA和α1-Collagen、TNF-α和TGF-β1均明显上调（P<0.05）。结论 AS-Ⅳ可能通过下调自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1的表达，抑制HSCs的活化，进而改善肝纤维化。

关键词

黄芪甲苷 / 肝星状细胞 / 自噬 / 肝纤维化 / 炎症因子 / 雷帕霉素