基于十二烷基硫酸钠/十六烷基硫酸钠的毛细管电泳方法的建立和验证

摘要

目的 针对帕妥珠单抗和美泊利珠单抗，建立基于十二烷基硫酸钠（SDS）和十六烷基硫酸钠（SHS）的毛细管电泳方法用于蛋白质纯度分析。方法 基于2025版《中华人民共和国药典》收载的十二烷基硫酸钠毛细管电泳（CE-SDS）方法，对SDS样品缓冲液和凝胶缓冲液中添加的SHS的浓度进行优化；建立方法验证可接受标准，并对优化后的方法进行专属性、范围、准确度和精密度验证。结果 在凝胶缓冲液和样品缓冲液中添加0.2%SHS，可有效消除CE-SDS方法本身导致的聚体含量异常增高现象，且该方法专属性较好；线性关系R²均大于0.99；特定片段的可报告范围2.22%～3.37%；主峰的可报告范围不小于86.53%；进样时间范围是10～60 s；该方法的定量限为0.33%；各分析样品特定片段回收率均在91%～105%之间，主峰回收率均在98%～104%之间；仪器线性样品（L2～L7）和分析线性样品（S2～S6）重复性和中间紧密度RSD均小于20%。结论 本研究建立了基于SDS/SHS的毛细管电泳方法，用于测定帕妥珠单抗和美泊利珠单抗的分子大小变异体，能够准确反映样品的纯度和聚体含量。

关键词

毛细管电泳 / 帕妥珠单抗 / 美泊利珠单抗 / CE-SDS / SHS / 方法学验证