抗IL-17A单克隆抗体药物的质量控制

Quality control of anti⁃IL⁃17A monoclonal antibody drug

摘要

目的 研究并建立针对抗白细胞介素（IL）-17A单抗关键质量属性的质控方法。 方法 采用生长相关基因α（GRO α）细胞因子生物学活性测定法检测生物学活性；采用反相色谱测定肽图谱，采用毛细管等电聚焦电泳（cIEF）测定等电点，采用还原/非还原十二烷基硫酸钠毛细管凝胶电泳（CE-SDS）、分子排阻色谱（SEC-HPLC）进行单抗纯度的测定；运用离子交换色谱（IEC-HPLC）测定电荷异质性；运用亲水-超高效液相色谱（HILIC-UPLC）分析抗IL-17A单抗的糖基化；采用ELISA法检测IL-17A结合活性。 结果 抗IL-17A单抗的生物学活性的半数最大效应浓度（EC₅₀）值为（6.70±1.19）ng/mL；IL-17A结合活性的EC₅₀值为（35.60±3.70）ng/mL；cIEF检测的主峰等电点为7.30±0.004；非还原CE-SDS主峰面积百分比为（96.95±0.12）%，还原CE-SDS重链（HC）和轻链（LC）的峰面积百分比之和为（98.38±0.11）%；SEC-HPLC主峰面积百分比为（99.55±0.01）%；离子交换色谱中主峰面积百分比为（73.07±0.12）%，酸性峰面积百分比为（16.52±0.05）%，碱性峰面积百分比为（10.41±0.10）%；N-聚糖分析中高甘露糖基化5单糖所占比例为（1.96±0.03）%，岩藻糖基化所占比例为（88.69±0.44）%，半乳糖基化单糖所占比例为（11.96±0.03）%。 结论 本研究成功建立了抗IL-17A单抗关键质量属性的质量控制分析方法，可用于该类单抗产品的质量控制。

Abstract

Objective To establish quality control methods for key quality attributes（KQAs） of anti-interleukin 17A（IL-17A） monoclonal antibodies（mAbs）. Methods The biological activity was determined by GROα cytokine bioactivity assay. Peptide mapping was analyzed by reverse-phase chromatography. The isoelectric point was measured by capillary isoelectric focusing electrophoresis（cIEF）. Purity was evaluated by reduced/non-reduced capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfonate（CE-SDS） and size exclusion-high performance liquid chromatography（SEC-HPLC）. Charge heterogeneity was assessed by ion exchange chromatography（IEC-HPLC）. Glycosylation of anti-IL-17 mAb was analyzed by hydrophilic-ultra high performance liquid chromatography（HILIC-UPLC）. The binding activity of IL-17A was detected by ELISA. Results The half maximal effective concentration（EC₅₀） for the biological activity of anti-IL-17A monoclonal antibodies was （6.70±1.19）ng/mL. The EC₅₀ of IL-17A binding activity was （35.60±3.70）ng/mL. The main peak isoelectric point determined by cIEF was 7.30±0.004. The percentage of main peak area by non-reduced CE-SDS was （96.95±0.12）%， and the sum of peak area percentages of heavy chain（HC） and light chain（LC） in reduced CE-SDS was （98.38±0.11）%. The percentage of main peak area by SEC-HPLC was （99.55±0.01）%. In ion exchange chromatography， the percentage of main peak area was （73.07±0.12）%， the percentage of acidic peak area was （16.52±0.05）%， and the percentage of basic peak area was （10.41±0.10）%. In N-glycan analysis， the total proportion of high-mannose glycosylation 5 monosaccharides was （1.96±0.03）%， the total proportion of fucosylation was （88.69±0.44）%， and the total proportion of galactosylation monosaccharides was （11.96±0.03）%. Conclusion Quality control analytical methods for the critical quality attributes（CQAs） of the anti-IL-17A monoclonal antibody have been successfully established， and can be applied to the quality control of this category of monoclonal antibody products.

Graphical abstract

关键词

抗白介素17A单抗 / 白介素17A / 纯度 / 生物学活性 / 电荷异质性 / 质量控制

Key words

anti-interleukin 17A monoclonal antibody / interleukin 17A / purity / biological activity / charge heterogeneity / quality control

自身免疫疾病是以局部或全身性异常炎症免疫反应为特征的炎症免疫性疾病，疾病种类多，患者人群庞大，已成为仅次于肿瘤的第二大疾病。无论是国内还是国外，自身免疫疾病治疗还有巨大需求尚未被满足。目前，多款自身免疫疾病领域的国产抗体药物已密集进入商业化阶段。白细胞介素17A（interleukin 17A，IL-17A）是其中竞争最激烈的靶点之一，它也是治疗炎症性皮肤病的有效靶点之一^［1］，目前，已有多家企业致力于IL-17A同靶点的单克隆抗体制剂研究，广泛用于治疗银屑病^［2］和强直性脊柱炎^［3，4］。

IL-17A是Th17细胞分泌的关键促炎因子，通过与细胞表面的IL-17受体结合，激活下游炎症信号通路（如NF-κB、MAPK等），诱导多种促炎因子（如IL-6、TNF-α、趋化因子等）和抗菌肽的表达，导致炎症反应和组织损伤。高亲和IL-17A单抗可与IL-17A精准结合，阻止其与IL-17受体复合物的相互作用，从而抑制炎症因子的释放。在临床实验中被证明安全性和耐用性良好，可快速、强效、持续缓解中重度银屑病的皮损^［5］和强直性脊柱炎。

目前，单克隆抗体药物陆续纳入医保^［6，7］，国内已有4款IL-17A单抗获批上市，分别为司库奇尤单抗^［8，9］、依奇珠单抗^［10］、布罗利尤单抗和赛立奇单抗，随着新靶点单克隆抗体药物以及生物类似药的不断增加，提高和完善单抗制品的质量控制方法，是其药物放行和监管的重要环节。本文为了有效地对抗IL-17A单抗进行质量控制，保证其药物的安全性和有效性，在参考现行版《中华人民共和国药典》^［11］和人用药品注册技术要求国际协调会议（The International Council for Harmonisation of Technical Requirements for Pharmaceuticals for Human Use，ICH）指导要求^［12］的基础上，对抗IL-17A单抗进行生物学活性、肽图分析、等电点分析、纯度分析、电荷异质性分析、糖谱分析等，分析了产品的关键质量属性，为抗IL-17A单抗的质量控制提供参考和指导。

1 材料与方法

1.1 抗体和主要试剂

抗IL-17A单克隆抗体（以下简称抗IL-17A单抗）及其参比品为中国食品药品检定研究院（National Institutes for Food and Drug Control，NIFDC）单克隆抗体产品室留样。Hs27细胞购自美国ATCC公司。Human CXCL1/GROα Immunoassay试剂盒购自美国R&D SYSTEMS公司，Recombinant Human Interleukin-17（100 μg）购自中国上海博飞美科化学科技有限公司，高糖DMEM培养基购自美国Hyclone公司。二硫苏糖醇（DTT）、8.0 mol/L盐酸胍购自美国ThermoScientific公司；碘乙酰胺（IAM）购自美国Biosciences公司；CIEF Peptide PI Marker（pI分别为10.0， 9.5， 7.0， 5.5， 4.1）和CIEF Gel Polymer购自美国Beckman公司；Pharmalyte 3-10购自加拿大GE Healthcare公司；色谱级甲酸、色谱级乙腈、异丙醇和无水乙醇购自美国ThermoFisher公司；三氟乙酸（TFA）、尿素、三羟甲基氨基甲烷（Tris）、二氯甲烷、六水合硝酸钴、硫氰酸铵和氯化钠、遗传霉素、2-巯基乙醇、ACES、氯化钠、氢氧化钠、氰基硼氢化钠、SDS、PBS、无水磷酸氢二钠、盐酸、硫酸、碳酸钠、碳酸氢钠、二水合磷酸二氢钠、二甲基亚砜磷酸和无水硫酸钠均购自美国Sigm-Aldrich公司；谷氨酰胺、胎牛血清购自美国Gibco；肽-N-糖苷酶F（PNGase F）购自美国New England Biolabs公司。胰蛋白酶购自美国Promega公司。过氧化物酶-亲和素纯山羊抗人IgG（H+L）购自Jackson公司；TMB购自中国Solarbio公司。

1.2 采用生长相关基因α（GRO α）细胞因子生物学活性测定法检测抗IL-17A单抗的活性

首先取对数生长期的Hs27细胞用测定培养基悬浮，并调至细胞密度约为1×10⁵个/mL，以100 μL/孔加入96孔板；用完全培养基稀释样品，以1 µg/mL为起始浓度，按照1∶3，1∶1.5，1∶1.5，1∶1.5，1∶1.5，1∶1.5，1∶1.5，1∶3的比例依次稀释（共9个浓度），再用完全培养基将IL-17储备液稀释至30 ng/mL，将稀释后的样品和储备液分别取100 µL至96孔板中，混匀。以50 μL/孔加入细胞培养板中，37 ℃，5% CO₂培养17~19 h；其次，制备GROα标准品，以2 500 pg/mL作为初始浓度，按照1∶2的比例一次稀释（共10个稀释度）；再次，各取制备好的GROα标准品和细胞培养上清100 μL/孔加入96孔板中，室温孵育1.5 h，然后甩去板中溶液，再以200 μL/孔加入GROα Conjugate，2~8 ℃孵育1 h后，再甩去板中液体，200 μL/孔加入试剂盒中显色液，室温避光孵育15 min， 以100 μL/孔加入终止液，用酶标仪在波长450 nm处测定吸光度。最后，采用四参数法，以样品浓度的对数为横坐标，以平均吸收值为纵坐标，计算半数最大效应浓度（concentration for 50% of maximal effect，EC₅₀）。

1.3 采用ELISA法测定抗IL-17A单抗结合活性

取0.5 µg/mL IL-17蛋白溶液，以100 μL/孔加入高结合的96孔板中，2~8 ℃孵育16~20 h。后加入封闭液300 μL/孔，室温封闭1~2 h。以40 000 ng/mL为抗IL-17A单抗的起始浓度，按照1∶4倍比稀释样品，共10个稀释度，以100 μL/孔至对应孔中，37 ℃孵育60 min。取100 ng/mL的检测抗体工作液，以100 μL/孔加入，室温孵育60 min。取TMB底物溶液以100 μL/孔加入，室温避光孵育15~25 min；以100 μL/孔加入终止液，在波长450 nm处测定吸光度。

1.4 采用反相高效液相色谱法（reversed phase high performance liquid chromatography， RP-HPLC）测定抗IL-17A单抗的肽图谱

取1 mg样品和参比品，分别加入含6 mol/L盐酸胍的0.25 mol/L Tris-HCl，至终体积为100 μL，再分别加入2 μL 1 mol/L DTT，混匀后置于37 ℃水浴1 h，取出冷却至室温后，分别加入6 μL 1 mol/L IAM，室温避光孵育30 min后，混匀。取上述处理后样品，分别加入50 mmol/L Tris-HCl溶液95 µL。另取100 μL的50 mmol/L Tris-HCl缓冲液作为空白溶液。样品和参比品与空白溶液中分别加入1 μL胰酶溶液，混匀后37 ℃水浴酶切16~18 h。取出冷却至室温，加入0.5 μL甲酸，混匀，终止反应。再将上述处理后样品12 000 r/min离心1 min，取上清液放入上样瓶中。采用Waters ACQUITY UPLC Peptide BEH C₁₈（150 mm×2.1 mm，1.7 μm，130Å）色谱柱分离。检测条件：流动相A为0.05%的TFA水溶液，流动相B为0.05%的TFA乙腈溶液，进行梯度洗脱（0~30 min，2.0%→2.0%流动相B；30~30.1 min，2.0%→98.0%流动相B；30.1~90.0 min，98%→98%流动相B），流速0.2 mL/min，上样体积10 μL，进样器温度10 ℃，柱温65 ℃，检测波长214 nm。比较样品和对照品色谱图是否存在差异。

1.5 采用毛细管等电聚焦电泳（capillary isoelectricfocusing electrophoresis， cIEF）测定抗IL-17A单抗的等电点

使用cIEF法进行分析，将样品用超纯水调整浓度至约6.0 mg/mL，取上述样品2 μL，加入两性电解质混合物118 μL（100 μL 3 mol/L尿素-CIEF胶，6 µL两性电解质溶液Pharmalyte 3-10，10 μL 500 mmol/L L-精氨酸，1 μL 200 mmol/L IDA，cIEF pI Marker 10/9.5/5.5/4.1各1 μL），涡旋混匀。取100 μL，置于进样瓶。分析条件：毛细管有效长度20 cm，总长度30.2 cm，控温20 ℃，检测波长为280 nm，样品室温度为10 ℃。分离方法：压力50 psi条件下用4.3 mol/L尿素冲洗3 min，然后用超纯水冲洗2 min；在压力25 psi条件下进样样品99.9 s，再用超纯水清洗毛细管两端，25 kV聚焦15 min后，30 kV迁移30 min，最后在50 psi条件下用超纯水冲洗2 min。

1.6 采用还原/非还原十二烷基硫酸钠毛细管凝胶电泳法（capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfonate，CE-SDS）测定抗IL-17A单抗纯度

用超纯水将样品稀释至10 mg/mL，取该溶液10 μL，加入SDS样品缓冲液85 μL，另外，还原CE-SDS法加入巯基乙醇5 μL，非还原CD-SDS法加入250 mmol/L IAM 5 μL，混匀，之后在7 ℃水浴条件下孵育8 min，室温放置5 min，涡旋混匀并离心之后取90 μL置于进样瓶中后上机分析。使用Beckman PA800 plus毛细管电泳系统，无涂层毛细管（总长度31 cm，有效长度20 cm）检测。检测条件：进样电压为5.0 kV，分离电压为15 kV，样品室温度为20 ℃，紫外检测波长为220 nm。计算样品轻链峰+重链峰（还原型）或主峰（非还原型）峰面积百分比以及片段峰面积百分比。

1.7 采用分子排阻色谱法（size exclusion-high performance liquid chromatography，SEC-HPLC）测定抗IL-17A单抗纯度

取稀释浓度为10 mg/mL的样品20 μL，采用Waters e2695高效液相色谱系统配备紫外检测器、Shodex Protein KW-803色谱柱（5 μm，8.0 mm×300 mm）进行检测。流动相A：50 mmol/L PBS，300 mmol/L NaCl，pH为7.0，流动相B：异丙醇，流速为0.7 mL/min，上样量20 μL，进样器温度5 ℃，柱温25 ℃，在波长280 nm处检测，使用面积归一化法计算单体和聚合物的百分比。

1.8 采用离子交换色谱法（ion exchange-high performance liquid chromatography，IEC-HPLC）测定抗IL-17A单抗电荷异质性

采用阳离子交换色谱法进行抗IL-17A单抗的电荷异质性分析。用原液缓冲液将样品稀释至5.0 mg/mL。取10 μL上机分析。利用Waters e2695高效液相色谱系统配备紫外检测器和Thermo Fisher ProPac^TM WCX-10 BioLC^TM色谱柱检测。检测条件：流动相A为20 mmol/L ACES（pH 6.60）；流动相B为含500 mmol/L氯化钠的缓冲液A；进行梯度洗脱（0~3 min，5%流动相B；3~33 min，5%→20%流动相B；33~33.1 min，20%→100%流动相B；33.1~38 min，100%流动相B；38~38.1 min，100%→5%流动相B），流速0.8 mL/min；检测波长280 nm；柱温40 ℃；样品室温度5 ℃。计算抗HER2抗体的主要活性成分（峰3*+峰3）和产品相关杂质（峰4）的峰面积百分比。

1.9 采用亲水-超高效液相色谱法（hydrophilic-ultra high performance liquid chromatography，HILIC-UPLC）测定抗IL-17A单抗寡糖含量

使用超高效液相色谱法进行结果检测，将相当于250 µg单抗的样品溶液用PBS稀释至90 µL，加入5 µL变性缓冲液，室温放置5 min后，依次加入5 μL 15% Triton® X-100、100 μL PBS、1 μL PNGase F，涡旋混匀，37 ℃孵育22~24 h。加入300 μL预冷的无水乙醇（-20 ℃预冷1 h以上），涡旋混匀，13 000 r/min离心10 min。取470 μL上清液于1.5 mL离心管中，置于真空浓缩仪中，室温下抽真空16~18 h。在真空干燥后的样品管底部加入5 μL标记试剂，涡旋混匀，置于干式恒温器中，65 ℃干浴4 h。取出加入100 μL超纯水溶解，涡旋至沉淀不再减少。10 000 r/min离心5 min，取上清液进行上样分析。色谱条件：流动相A为50 mmol/L甲酸铵，pH 4.4；流动相B为乙腈。使用Waters H-Class超高效液相色谱仪，荧光检测器进行分析，检测器激发波长265 nm，发射波长425 nm，色谱柱为Waters ACQUITY UPLC BEH Glycan column（1.7 μm，150 mm×2.1 mm）；进样体积为2.0 μL，柱温60 ℃，样品室温度为10 ℃。采用面积归一化计算Man5、岩藻糖和半乳糖糖型的含量。

2 结果

2.1 生物学活性

GROα系列标准品与吸光度值符合四参数方程式：Y=（A-D）/［1+（X/C） ^B ］+D，即在半对数坐标上呈现典型的S型曲线（见图1），即GROα标准曲线（A=0.082 4，B=0.979，C=1 630，D=4.88），以抗体浓度为横坐标，由GROα标准曲线得到的回归值为纵坐标，也符合四参数方程式：Y=（A-D）/［1+（X/C） ^B ］+D（见图2），抗IL-17A单抗参比品的EC₅₀值为（6.70±1.19）ng/mL，6次实验的RSD值为17.76%。

2.2 结合活性

IL-17A结合活性检测所得数据符合四参数方程式：Y=（A-D）/［1+（X/C） ^B ］+D，即在半对数坐标上呈现典型的S型曲线（见图3）。在IL-17A结合活性评价中，抗IL-17A单抗参比品的EC₅₀值为（35.60±3.70）ng/mL，6次实验的RSD值为10.4%。

2.3 肽图

本实验的样品室用胰蛋白酶酶切后，再经RP-HPLC分离后将样品与参比品的图谱进行比较，结果表明抗IL-17单抗的肽图图谱与其参比品具有可比性（见图4），可以发挥良好的鉴别作用。

2.4 等电点

cIEF分析表明，抗IL-17A单抗参比品中主峰等电点的值为7.30±0.004，6次实验的RSD值为0.05%（见图5）。

2.5 纯度

非还原CE-SDS分析表明，抗IL-17A单抗参比品的主峰面积百分比为（96.95±0.12）%，6次实验的RSD值为0.12%（见图6A）；还原CE-SDS分析表明，抗IL-17A单抗参比品的重链（HC）和轻链（LC）的峰面积百分比之和为（98.38±0.11）%，6次实验的RSD值为0.11%（见图6B）；SEC-HPLC分析表明，抗IL-17A单抗参比品主峰峰面积百分比为（99.55±0.01）%，6次实验的RSD值为0.01%（见图7）。

2.6 电荷异质性

电荷异质性分析显示，抗IL-17A单抗参比品的主峰面积之和百分比为（73.07±0.12）%，6次实验的RSD值为0.16%；酸性峰面积百分比为（16.52±0.05）%，6次实验的RSD值为0.30%；碱性峰面积百分比为（10.41±0.10）%，6次实验的RSD值为0.96%（见图8）。

2.7 N-糖基化分析

采用HILIC-UPLC对抗IL-17A单抗的分析，记录Man5、岩藻糖含量和半乳糖含量。其中岩藻糖含量为G0F、G1F和G2F峰面积百分比的和，半乳糖含量为G1F和G2F峰面积百分比的和。结果显示，抗IL-17A单抗高甘露糖5糖型所占比例为（1.96±0.03）%，6次实验的RSD值为1.53%；岩藻糖糖型所占比例为（88.69±0.44）%，6次实验的RSD值为0.50%；半乳糖基化单糖合计所占比例为（11.96±0.03）%，6次实验的RSD值为0.25%（见图9）。

3 讨论

治疗性单克隆抗体因作用机制明确、特异性强、副作用小且疗效显著，近年在自身免疫性疾病治疗领域发展迅猛。IL-17A作为调控炎症的核心靶点，其单抗在获批新药中占比持续攀升，已成为该类疾病治疗的重要手段。随着我国药品审评审批制度完善，本土药企纷纷布局IL-17A靶点，加速相关单抗研发。由于单抗作为生物大分子结构复杂、易受生产工艺影响，不同靶点单抗质控既存共性标准，亦需结合靶点特性制定专属方案，因此亟需建立IL-17A靶点单抗的科学质控体系。本文聚焦研发其生物学活性、纯度、电荷异质性、特异性鉴别及糖基化修饰等关键质量属性质控方法，为该类药物的研发生产、质量保障及临床应用提供可靠技术支撑。

体外生物学活性检测和结合活性检测是抗体药物质量控制中的重要项目。IL-17A是由T细胞产生的一种关键促炎因子，它能够诱导和调节机体的多种免疫应答反应，若产生过多可引起多种炎性反应性疾病包括如系统性红斑狼疮、风湿性关节炎等自身免疫病。抗IL-17A单抗能够阻断IL-17A激活的信号通路，阻止IL-17A与IL-17RA受体结合，降低由此通路激活的GROα水平，从而建立了GROα因子检测活性方法。因此，本研究首次以基于ELISA的抗原抗体结合实验来评估抗IL-17A抗体结合受体的能力。

鉴别是生物药质量控制的核心环节，其能确保药物身份真实、靶点专一，规避疗效失效或不良反应。作为结构复杂的生物大分子，抗体药物的生产工艺易受多种因素影响，且存在交叉污染、伪劣产品的潜在风险。肽图方法鉴别开发过程中常用胰蛋白酶^［13］和Lys-C蛋白酶^［14］，本研究抗IL-17A单抗选择胰蛋白主要考虑到其识别Arg/Lys双位点，酶切频率更高，能生成5~30个氨基酸的均匀短肽，适配LC-MS/MS鉴定与关键质量属性覆盖。且在常规变性、还原缓冲液中胰蛋白酶稳定性更强，酶切完全性与方法稳健性更优。而Lys-C仅识别Lys单一位点，酶切片段易过长或不完全，且受抗体糖基化修饰影响大，难以满足肽图分析的精准性与高效性需求。除此之外，还可以通过分子量、等电点和酶联免疫吸附试验等测定进行鉴别^［15］。

在IL-17A单抗药物的纯度分析中，SEC-HPLC^［16］与CE-SDS^［17］是两类核心互补的检测技术，二者通过差异化检测原理实现对药物质量的全面表征。SEC-HPLC基于分子体积与空间构象的差异进行分离，借助凝胶过滤色谱柱的分子筛效应，可精准区分IL-17A单抗中的单体、共价聚合体及非共价结合的多聚体组分，为评估抗体在生产、储存过程中的聚合稳定性提供关键数据支撑，是监控药物聚集风险的重要手段。而CE-SDS则通过十二烷基硫酸钠（SDS）与抗体的结合消除电荷异质性影响，使分析物仅依据分子量大小在毛细管电泳系统中实现高效分离，非还原CE-SDS能特异性识别由非共价键连接形成的片段杂质，还原CE-SDS则在二硫键还原剂作用下将抗体解聚为轻链、重链，可有效检出非糖基化重链、断裂片段等降解产物，精准反映抗体的完整性状态。由于IL-17A单抗的大小异质性既可能表现为聚合体形成，也可能体现为肽链断裂产生的片段杂质，将SEC-HPLC与CE-SDS联合应用，能从聚合体控制和碎片化分析两个关键维度构建全面的质量评估体系，充分覆盖药物生产及储存过程中可能出现的质量风险，为IL-17A单抗的质量控制提供科学、完善的技术支撑，保障药物的安全性与有效性。

IL-17A单抗的电荷异质性会直接影响其体内药动学特征与临床治疗效果，因此建立兼具互补性与必要性的检测方法对产品质量控制至关重要。针对该单抗电荷异质性的核心检测策略为cIEF与IEC-HPLC^［18］联合应用：cIEF具有超高分辨率、自动化操作便捷及重复性可靠优势；IEC-HPLC则基于离子交换作用机制实现各电荷异构体的高效分离，可精准量化各组分百分含量，结果稳定性与重现性更具优势。两种方法作用机制互为补充、技术优势深度融合，可共同满足工艺研发、质量放行、长期稳定性监控等多场景需求。

单抗药物的糖基化修饰^［19］受细胞系及生产工艺（尤其是细胞培养条件）的显著调控，其糖链结构直接关联药物疗效、稳定性、免疫原性及药代动力学特征，是单抗质量控制的核心指标。本研究采用高效液相色谱（HPLC）建立抗IL-17A单抗糖基化分析方法：通过优化色谱柱类型、流动相梯度及柱温条件，实现了主要糖型及低丰度变异体的基线分离；同时通过改进样品前处理流程，显著降低了基质干扰，该方法凭借简便的操作流程、优异的分离效能及精准的定量结果，为抗IL-17A单抗的糖基化质量控制提供了可靠的分析手段。

综上所述，依据《中国药典》和ICH Q6B的指导原则^［20］，本研究综合运用多种检测技术对抗IL-17A单抗的关键质量属性进行研究并建立了相应的质控方法，可有效地对抗IL-17A单抗进行质量控制，并对保障抗IL-17A单抗药物的安全性和有效性具有重要意义。

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基金资助

国家重点研发计划项目(2021YFF0600804)