miR-92a通过抑制KLF2和KLF4表达促进心肌细胞肥大

摘要

目的 探讨miR-92a在心肌细胞肥大过程中的作用及与靶基因Krüppel样因子2(KLF2)、Krüppel样因子4(KLF4)信号途径的相关性。方法 24只8周龄C57BL/6J小鼠随机分成对照组、模型组及miR-92a抑制剂（LNA-92a）组，每组8只。模型组与LNA-92a组均在第8天以1μg/（kg·min）剂量持续皮下泵入28 d血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）建立心肌细胞肥大模型。LNA-92a组在第1天、第18天分别以16 mg/kg剂量经尾静脉注射LAN-92a，模型组在相同时间以同种方式等剂量注射miR-92a抑制剂对照品（LNA-Ctrl），对照组给予等容量的生理盐水；所有小鼠均于第36天结束实验。体外培养AC16心肌细胞并随机分成3组：阴性对照组、AngⅡ模型组、AngⅡ+miR-92a抑制剂（anti-miR-92a）干预组。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测血清、心肌组织及心肌细胞中miR-92a及其靶基因（KLF2、KLF4）的mRNA水平，miR-483及其靶基因（CTGF、TGF-β）的mRNA水平；采用蛋白免疫印迹（Western blot）检测心肌组织和细胞中KLF2、KLF4、CTGF、TGF-β蛋白水平表达。细胞免疫荧光染色对比心肌细胞CTGF表达水平。结果 与对照组比较，模型组血清及心肌组织中miR-92a表达升高（P<0.01）、miR-483表达下降（P<0.01），心肌组织中KLF2、KLF4 mRNA及蛋白水平下降（P<0.01），心肌组织中CTGF、TGF-β mRNA及蛋白水平升高（P<0.01）；与模型组比较，LNA-92a组血清及心肌组织中miR-92a表达下降（P<0.05）、miR-483表达升高（P<0.05），心肌组织中KLF2蛋白、KLF4 mRNA及蛋白水平升高（P<0.01），心肌组织中KLF2 mRNA有升高趋势，但未达统计学意义（P=0.059），心肌组织中CTGF、TGF-β mRNA及蛋白水平下降（P<0.05）。AC16心肌细胞实验显示，与阴性对照组比较，AngⅡ模型组miR-92a表达升高（P<0.01）,KLF2、KLF4 mRNA及蛋白水平下降（P<0.01）,miR-483表达下降（P<0.05）,CTGF、TGF-β mRNA及蛋白水平升高（P<0.01）；与AngⅡ模型组比较，AngⅡ+anti-miR-92a干预组miR-92a表达下降（P<0.01）,KLF2、KLF4 mRNA及蛋白水平升高（P<0.01）,miR-483表达升高（P<0.05）,CTGF、TGF-β mRNA及蛋白水平下降（P<0.01）。与阴性对照组比较，AngⅡ模型组心肌细胞中CTGF相对荧光值显著升高（P<0.01）；与AngⅡ模型组比较，AngⅡ+anti-miR-92a干预组CTGF相对荧光值显著降低（P<0.01）。结论 miR-92a可能通过抑制KLF2和KLF4表达，导致miR-483表达下降，诱导心肌细胞肥大；拮抗miR-92a表达后，KLF2、KLF4及miR-483表达升高，心肌细胞肥大程度显著缓解。

关键词

血管紧张素Ⅱ / 心肌细胞肥大 / miR-92a / KLF2 / KLF4 / miR-483 / CTGF / TGF-β