黄芪甲苷通过激活自噬蛋白对新生大鼠缺氧缺血性脑病的神经保护作用

摘要

目的 研究黄芪甲苷（astragalosideⅣ，AS-Ⅳ）对新生SD大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）模型自噬的影响及其分子机制。方法 选取出生7 d的新生SD大鼠120只，随机分为6组：假手术组（sham组）、HIBD组、溶剂对照组（solvent组）、AS-Ⅳ组、自噬激活组（Rapa组）及自噬抑制组（3-MA组），每组20只。采用悬崖回避实验和负地趋向性实验观察大鼠早期行为变化。造模后24 h，每组随机取10只大鼠处死后取脑组织，HE染色观察脑组织形态及细胞凋亡，免疫组化染色检测自噬标记物Beclin-1、LC3-Ⅱ表达以观察早期神经改变。剩余大鼠饲养至27日龄，通过水迷宫实验评估其长期空间学习与记忆能力。结果 sham组无神经行为学及空间学习记忆能力损伤表现，神经细胞呈现规整排列；与sham组比较，HIBD组存在一定的神经损伤表现，神经细胞排列紊乱，部分胞核溶解、碎裂，胶质细胞增生，Beclin-1、LC3-Ⅱ阳性表达增加（P<0.05）。与HIBD组比较，solvent组神经行为学和脑组织形态无明显差异，Beclin-1、LC3-Ⅱ表达及空间学习记忆能力差异无统计学意义（P>0.05）;AS-Ⅳ组和Rapa组神经细胞排列较为规整，Beclin-1、LC3-Ⅱ阳性表达增加，水迷宫逃逸潜伏期明显缩短（P<0.05）;3-MA组神经损伤表现增加，神经细胞排列紊乱，Beclin-1、LC3-Ⅱ阳性表达减少（P<0.05）。与AS-Ⅳ组相比，Rapa组神经损伤表现减少，神经细胞结构更完整，Beclin-1、LC3-Ⅱ阳性表达增加（P<0.05）;3-MA组神经功能缺损程度加剧，神经细胞排布亦明显紊乱，Beclin-1、LC3-Ⅱ阳性表达减少（P<0.05）。结论 AS-Ⅳ可能通过上调自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ表达激活自噬在HIBD早期及长期发展中发挥神经保护作用。

关键词

新生儿缺氧缺血性脑病 / 黄芪甲苷 / 自噬 / Beclin-1 / LC3-Ⅱ / 神经保护