五子衍宗方对D-半乳糖诱导的GC-1细胞凋亡的保护作用

摘要

目的 探讨五子衍宗方（WZ）对D-半乳糖（D-gal）所致GC-1精原细胞凋亡的保护作用及其机制。方法 将GC-1细胞分为对照组、模型组及五子衍宗方低、中、高剂量组。以250 mmol/L D-gal刺激48 h诱导GC-1细胞构建精原细胞凋亡模型。GC-1细胞五子衍宗方低、中、高剂量组分别给予0.1,0.2,0.4 mg/mL五子衍宗方预处理12 h后，再进行造模。通过MTT检测细胞活力；流式细胞术检测细胞凋亡；荧光探针检测细胞ROS和钙离子水平；免疫荧光法检测细胞中Nrf2信号通路相关蛋白Nrf2、HO-1和NQO1蛋白表达和定位；Western blot法检测细胞中Nrf2、UPR^ER关键蛋白（GRP78）及其相关通路蛋白（p-PERK、p-IRE1、p-eIF2α、XBP1、ATF4和ATF6），以及内质网应激（ERS）介导的凋亡相关蛋白（Caspase-12、Caspase-9和Caspase-3）的表达水平。结果 与对照组相比，模型组细胞存活率降低（P<0.01），细胞凋亡率明显增加（P<0.01）；细胞内ROS、钙离子、Caspase-12、Caspase-9和Caspase-3水平明显升高（P<0.01）,Nrf2、HO-1、NQO1、GRP78、p-PERK、p-IRE1、p-eIF2α、XBP1、ATF4和ATF6水平明显降低（P<0.01）。与模型组相比，五子衍宗方低、中、高剂量组细胞存活率均升高（P<0.01），细胞凋亡率剂量依赖性降低（P<0.01）；细胞内ROS、钙离子、Caspase-12、Caspase-9和Caspase-3水平降低（P<0.01），且除Caspase-12外，其他指标均呈剂量依赖性变化；Nrf2、HO-1、NQO1、GRP78、p-PERK、p-IRE1、p-eIF2α、XBP1、ATF4和ATF6水平升高（P<0.05），且除GRP78外，其他指标均呈剂量依赖性变化。结论 WZ可减轻D-gal诱导的GC-1精原细胞凋亡，其机制可能与激活Nrf2信号通路提高GC-1精原细胞抗氧化能力，进而增强UPR^ER，减轻ERS介导的凋亡通路相关。

关键词

五子衍宗方 / Nrf2信号通路 / 内质网应激 / 精原细胞 / 凋亡 / 内质网 / 未折叠蛋白反应