广藿香醇通过下调CD47表达促进巨噬细胞对人胃癌细胞的吞噬作用

摘要

目的 探讨广藿香醇（PA）对巨噬细胞吞噬人胃癌细胞的影响及其机制。方法 采用RT-PCR和Western blot检测人正常胃黏膜上皮细胞GES-1及胃癌MKN45、SNU-1、HGC-27和MKN74等胃癌细胞系中CD47的mRNA和蛋白表达水平。以MKN45细胞作为研究对象，CCK-8检测不同浓度（0,0.1,0.25,0.5,1,10,20 mmol/L）PA处理下MKN45细胞的增殖活性；再采用不同浓度（0,0.25,0.5,1 mmol/L）PA处理MKN45细胞24 h，采用RT-PCR和Western blot检测细胞中CD47的mRNA和蛋白表达水平。将人单核细胞THP-1诱导为M1型巨噬细胞，采用流式细胞术检测M1型巨噬细胞表面标志物CD86和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的水平。将MKN45细胞分为blank组、vector组和oe-CD47组，将CD47过表达质粒（oe-CD47）及其阴性对照质粒（vector）分别转染至MKN45细胞48 h后采用RT-PCR和Western blot检测细胞中CD47的mRNA和蛋白表达水平以验证转染效率。经1 mmol/L PA处理，采用羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯（CFSE）对MKN45细胞进行标记，再与M1型巨噬细胞共培养6 h，将MKN45细胞分为对照组、PA组、PA+vector组和PA+oe-CD47组。采用流式细胞术检测细胞中CD11b⁺/CFSE⁺双阳性率以评估巨噬细胞对MKN45细胞的吞噬作用。结果 与GES-1细胞系比较，MKN45、SNU-1、HGC-27和MKN74等胃癌细胞系中CD47 mRNA和蛋白表达水平显著升高，其中在MKN45细胞系中表达最高（均P<0.05）。经不同浓度PA处理的MKN45细胞增殖活性以剂量依赖性显著降低（不同浓度PA组与0 mmol/L PA组比较均P<0.05）。与0 mmol/L PA组比较，0.25,0.5,1 mmol/L PA组细胞中CD47 mRNA和蛋白表达水平均显著降低（均P<0.05），其中1 mmol/L PA浓度效果最佳。THP-1细胞经诱导后，CD86和iNOS阳性率分别为96.54%和97.46%，确定M1型巨噬细胞诱导成功。与blank组比较，oe-CD47组细胞中CD47的mRNA和蛋白表达水平均显著升高（均P<0.05），而vector组差异无统计学意义（P>0.05），确定CD47过表达细胞模型构建成功（转染效率为82%）。与对照组比较，PA组细胞中CD11b⁺/CFSE⁺双阳性率显著升高（P<0.05）；与PA组比较，PA+oe-CD47组细胞中CD11b⁺/CFSE⁺双阳性率显著降低（P<0.05），而PA+vector组差异无统计学意义（P>0.05）。结论 广藿香醇通过下调CD47表达，增强巨噬细胞对胃癌细胞的吞噬作用。

关键词

广藿香醇 / CD47 / 巨噬细胞 / 吞噬 / 胃癌 / 肿瘤免疫治疗