丹参酮ⅡA对UVB辐射人角质形成细胞的保护作用

摘要

目的 探讨丹参酮ⅡA对中波紫外线（UVB）辐射所致人角质形成细胞损伤的保护作用。方法 利用HaCaT人永生化角质形成细胞建立UVB辐射损伤模型，首先使用不同剂量（30,60,90,120 mJ/cm2）辐射细胞，采用CCK-8法检测细胞活力，确定最佳损伤剂量。随后，使用不同浓度（0.125,0.25,0.5,1,2,4μmol/L）的丹参酮ⅡA处理受损细胞，采用CCK-8法检测细胞活力，筛选最佳干预浓度。再将HaCaT细胞分为3组：control组（正常培养）、UVB组（90 mJ/cm2 UVB辐射）、丹参酮ⅡA组（90mJ/cm2 UVB辐射后给予1μmol/L丹参酮ⅡA干预）。采用CCK-8法检测细胞活力，采用乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒检测细胞LDH释放量，采用荧光探针法检测活性氧（ROS）水平，倒置显微镜观察细胞形态，采用实时荧光定量PCR法和Western blot法分别检测血红素氧合酶-1（HO-1）和核因子E2相关因子2（Nrf-2）的mRNA及蛋白表达水平。结果 UVB辐射损伤模型的最佳辐射量为90 mJ/cm²；丹参酮ⅡA最佳药物干预浓度为1μmol/L。与control组比较，UVB组及丹参酮ⅡA组细胞增殖活性显著降低（P<0.05）,HO-1、Nrf-2的mRNA表达水平及蛋白表达水平显著降低（P<0.05）,LDH水平及ROS荧光强度显著升高（P<0.05）。与UVB组比较，丹参酮ⅡA组细胞增殖活性显著升高（P<0.05）,HO-1、Nrf-2的mRNA及蛋白表达水平显著升高（P<0.05）,LDH水平及ROS荧光强度显著降低（P<0.05）。control组细胞贴壁紧密且分布均匀，细胞之间相互连接成片，胞质丰富，细胞核形态规则；UVB组细胞胞质中出现空泡样改变，细胞核出现固缩、变形等异常情况；丹参酮ⅡA组细胞贴壁情况良好，细胞之间的连接增多，胞质中的空泡样改变减少，细胞核形态相对规则。结论 丹参酮ⅡA可减轻UVB辐射诱导的人角质形成细胞损伤，其机制可能与激活Nrf-2/HO-1通路、减轻氧化应激及稳定细胞膜结构有关。

关键词

人角质形成细胞 / 丹参酮ⅡA / UVB辐射 / 表皮 / HO-1 / Nrf-2