AIM2对宫颈癌细胞PANoptosis的影响及其机制

摘要

目的 探讨AIM2对宫颈癌HeLa细胞PANoptosis的影响及潜在机制。方法 (1)采用UCSC数据库分析AIM2基因在宫颈癌中的表达水平。通过Western blot和RT-qPCR检测宫颈癌细胞HeLa和C33a及正常宫颈上皮细胞HCer中AIM2及PANoptosis相关分子[细胞焦亡（Caspase-1）、凋亡（Caspase-3, cleaved-Caspase-3）、坏死性凋亡（MLKL,p-MLKL）]的表达水平。(2)通过慢病毒转染构建AIM2稳定敲低的HeLa细胞模型（sh-AIM2），并设空白组和阴性对照组（sh-NC）。采用Western blot检测各组细胞中AIM2和PANoptosis相关蛋白的表达；通过EthD-Ⅲ、TUNEL及PI染色分别检测细胞焦亡、凋亡及坏死性凋亡情况。(3)基于UCSC、GEPIA数据库分析宫颈癌PLA2G7基因表达水平及其与AIM2基因表达的相关性；通过Western blot检测宫颈癌细胞中PLA2G7的基础表达及敲低AIM2后的变化。(4)将HeLa细胞分为control组、Melittin(PLA2G7激动剂)组、sh-AIM2组、sh-AIM2+Melittin组，Western blot检测各组细胞中AIM2、PLA2G7及PANoptosis相关分子的表达水平。结果 (1)UCSC数据库中AIM2在宫颈癌组织的表达显著高于正常宫颈上皮组织（P<0.05）。与HCer细胞及C33a细胞相比，HeLa细胞中AIM2的蛋白及mRNA水平均显著升高（P<0.05）,Caspase-1、Caspase-3、MLKL的mRNA水平升高（P<0.05）;Caspase-1、cleaved-Caspase-3、p-MLKL蛋白表达升高（P<0.05）。(2)与空白组比较，sh-AIM2组细胞中AIM2的蛋白表达水平降低（P<0.05）,Caspase-1、cleavedCaspase-3、p-MLKL的表达均降低（P<0.05），细胞焦亡、凋亡及坏死性凋亡水平均降低（P<0.05）。(3)UCSC数据库中PLA2G7在宫颈癌组织的表达显著高于其在正常宫颈上皮组织的表达（P<0.05）,GEPIA数据库显示宫颈癌患者中AIM2与PLA2G7的表达水平存在正相关（r=0.27,P<0.05）。Western blot结果显示，与C33a细胞相比，HeLa细胞中PLA2G7显著升高，下调AIM2后PLA2G7表达显著降低（P<0.05）。(4)与control组相比，Melittin组HeLa细胞中PLA2G7、Caspase-1、cleaved-Caspase-3、p-MLKL的蛋白表达上调（P<0.05），而sh-AIM2组上述分子表达则显著下调（P<0.05）。与sh-AIM2组相比，sh-AIM2+Melittin组联合处理可逆转上述分子的低表达水平（P<0.05）。结论 宫颈癌中AIM2和PLA2G7高表达且呈正相关，下调AIM2可降低PLA2G7表达，二者协同促进宫颈癌HeLa细胞PANoptosis，为宫颈癌治疗提供潜在方向。

关键词

宫颈癌 / AIM2炎症小体 / PANoptosis / PLA2G7 / 细胞焦亡 / 凋亡 / 坏死性凋亡