PCSK9抑制剂依洛尤单抗对缺氧诱导的血管内皮细胞损伤的影响及其机制

摘要

目的 探讨PCSK9抑制剂依洛尤单抗（evc）对缺氧（hypoxia）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的影响及其机制。方法 体外培养人脐静脉内皮细胞，分为control组、control+evc组、hypoxia组、hypoxia+evc组、hypoxia+evc+LPS(TLR4激活剂)组、hypoxia+evc+KLA(TLR4特异性激动剂)组、hypoxia+evc+TAK-242(TLR4抑制剂)组。control组细胞不做干预；control+evc组经终浓度10μg/mL依洛尤单抗处理1 h后常氧培养4 h;hypoxia组缺氧培养4 h;hypoxia+evc组经10μg/mL依洛尤单抗处理1 h后缺氧培养4 h;hypoxia+evc+LPS组、hypoxia+evc+KLA组和hypoxia+evc+TAK-242组经10μg/mL依洛尤单抗分别与0.5μg/mL LPS、10μg/mL KLA和100μg/L TAK-242共同处理1 h后缺氧培养4 h。蛋白免疫印迹法检测PCSK9、TLR4、NF-κBp65、p-NF-κB-p65蛋白的表达。流式细胞术检测细胞凋亡率，细胞划痕法检测细胞迁移能力，蛋白免疫印迹法或酶联免疫吸附法（ELISA）检测炎症因子IL-6、TNF-α蛋白水平，透射电镜观察线粒体超微结构（膜、脊、基质）。结果 与control组比较，hypoxia组PCSK9蛋白表达量、凋亡率、IL-6及TNF-α表达均上调（P<0.05），细胞迁移率下降（P<0.05）,TLR4、NF-κB-p65、p-NF-κB-p65蛋白表达上调（P<0.05），线粒体超微结构损伤更严重。与hypoxia组比较，hypoxia+evc组PCSK9蛋白表达量、凋亡率、IL-6和TNF-α蛋白表达均下调（P<0.05），迁移率上升（P<0.05）,TLR4、NF-κB-p65、p-NF-κB-p65蛋白表达下调（P<0.05），线粒体超微结构损伤明显改善。与hypoxia+evc组相比，hypoxia+evc+LPS组和hypoxia+evc+KLA组TLR4、NF-κB-p65、p-NF-κB-p65蛋白表达，以及凋亡率、IL-6和TNF-α蛋白表达上调（P<0.05），细胞迁移率下降（P<0.05）。与hypoxia+evc组比较，hypoxia+evc+KLA组线粒体超微结构损伤更严重。与hypoxia+evc组相比，hypoxia+evc+TAK-242组TLR4、NF-κB-p65、p-NF-κB-p65蛋白表达，以及凋亡率、IL-6和TNF-α蛋白表达下调（P<0.05），细胞迁移率上升（P<0.05）。结论 依洛尤单抗可通过阻断TLR4/NF-κB通路，下调缺氧诱导的HUVECs中PCSK9蛋白表达、凋亡及炎症因子表达，并增强细胞迁移能力，改善线粒体超微结构损伤。

关键词

依洛尤单抗 / 急性冠脉综合征 / 血管内皮细胞 / 缺氧 / 炎症因子 / 细胞凋亡 / 迁移