芒果苷通过FoxO1/PDK4减轻肾缺血再灌注期间氧化应激损伤

摘要

目的 探讨芒果苷（MG）对肾缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法 (1)将C57BL/6小鼠随机分为假手术组、I/R组、I/R+MG高剂量（20 mg/kg）组、I/R+MG低剂量（5 mg/kg）组。I/R+MG高剂量和低剂量组分别给与相应剂量MG预处理3 d后肾缺血再灌注。再灌注24 h后处死小鼠，收集血清及肾组织样本，检测血清肌酐、尿素氮和MDA含量；HE染色观察肾组织病理学改变；免疫组化和Western blot检测PDK4蛋白表达水平。(2)将肾小管上皮细胞（HK-2）分为对照组、缺氧/复氧（H/R）组、H/R+MG高剂量（10μmol/L）组、H/R+MG低剂量（5μmol/L）组。H/R+MG高剂量组和H/R+MG低剂量组分别给与相应剂量的MG预处理1 h后进行缺氧复氧。CCK-8法检测细胞活力，DCFH-DA荧光探针检测细胞ROS含量。(3)将HK-2细胞分为H/R+空载组、H/R+空载+MG组、H/R+PDK4过表达+MG组；DCFH-DA荧光探针检测细胞内ROS水平。另设H/R组、H/R+MG组、H/R+MG+LMB组、H/R+MG+Imp组，采用免疫荧光和Western blot检测FoxO1亚细胞定位及核输出抑制剂LMB和输入抑制剂Imp对其定位的影响。结果 (1)与假手术组相比，I/R组血清肌酐、尿素氮、MDA和PDK4蛋白表达显著升高（P<0.05），肾小管刷状缘大部分脱落，肾小管扩张严重，蛋白管型和组织坏死；与I/R组相比，I/R+MG各组血清肌酐、尿素氮、MDA和PDK4蛋白表达显著降低（P<0.05），肾小管上皮细胞排列整齐，组织坏死减少；与I/R+MG低剂量组相比，I/R+MG高剂量组PDK4蛋白表达显著降低（P<0.05）。(2)与对照组相比，H/R组细胞活力降低（P<0.05）,PDK4和细胞核中FoxO1蛋白表达显著升高（P<0.05）；与H/R组相比，H/R+MG各组细胞活力升高，PDK4和细胞核中FoxO1蛋白表达显著降低（均P<0.05）；与H/R+MG低剂量组相比，H/R+MG高剂量组细胞活力显著升高，PDK4和细胞核中FoxO1蛋白表达显著降低（均P<0.05）。(3)与H/R+空载+MG组相比，H/R+PDK4过表达+MG组ROS显著增多（P<0.05）。与H/R+MG组相比，H/R+MG+LMB组FoxO1和PDK4蛋白表达显著升高，ROS显著增多（均P<0.05）;H/R+MG+Imp组FoxO1和PDK4蛋白表达显著降低，ROS显著减少（均P<0.05）。结论 芒果苷通过抑制转录因子FoxO1的核易位，下调PDK4表达，从而减轻肾缺血再灌注损伤诱导的氧化应激损伤。

关键词

芒果苷 / 肾缺血再灌注损伤 / FoxO1 / PDK4 / 氧化应激