蓝萼甲素激活巨噬细胞M2极化促进腰椎间盘突出重吸收

摘要

目的 探究蓝萼甲素（GLA）对腰椎间盘突出（LDH）重吸收的作用及其分子机制。方法 将人单核细胞白血病细胞THP-1分为对照组、PMA诱导组、5μmol/L GLA组、10μmol/L GLA组和20μmol/L GLA组，采用免疫荧光染色检测各组细胞M1/M2极化水平。各组细胞与人髓核细胞进行Transwell共培养实验，采用CCK-8实验检测髓核细胞增殖活性，TUNEL染色实验检测髓核细胞凋亡。采用自体髓核移植法建立LDH大鼠模型，分为LDH组、GLA组（5 mg/kg GLA）和激活剂组（5 mg/kg GLA+5 mg/kg PMA），未建模大鼠设为对照组，每组10只。末次给药1 d后，采用Von Frey纤维丝法测定其机械痛阈值，采用ELISA法检测血清TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10水平，HE和Masson染色检测大鼠椎间盘组织病理学和形态学变化，免疫荧光染色检测巨噬细胞M1/M2极化，Western blot检测MMP-3、TIMP-1、VEGF、COLⅡ、p-NF-κB p65、NF-κB p65、p-IκBα和IκBα蛋白表达水平。结果 与对照组比较，PMA诱导组髓核细胞凋亡率、iNOS阳性率和iNOS⁺/Arg1⁺比值均升高（P<0.05），髓核细胞增殖活力和Arg1阳性率均降低（P<0.05）；与PMA诱导组比较，5,10,20μmol/L GLA组髓核细胞凋亡率、iNOS阳性率和iNOS⁺/Arg1⁺比值均降低（P<0.05），髓核细胞增殖活力和Arg1阳性率均升高（P<0.05）。与LDH组比较，GLA组大鼠椎间盘结构破坏减轻，组织病理评分降低（P<0.05），大鼠椎间盘组织重吸收质量、机械痛阈值、IL-10水平、COLⅡ、TIMP-1蛋白水平和Arg1阳性率均升高（P<0.05）,TNF-α、IL-1β和IL-6水平、MMP-3和VEGF蛋白水平、iNOS阳性率以及MMP-3/TIMP-1、iNOS⁺/Arg1⁺、p-NF-κB p65/NF-κB p65和p-IκBα/IκBα比值均降低（P<0.05）；激活剂逆转了GLA对椎间盘突出重吸收的改善作用。结论 蓝萼甲素可能通过抑制NF-κB信号通路激活，激活巨噬细胞M2型极化，抑制炎性因子分泌和髓核细胞凋亡，促进髓核细胞外基质合成，进而推动突出椎间盘组织的重吸收。

关键词

蓝萼甲素 / 巨噬细胞极化 / 腰椎间盘突出 / 重吸收 / NF-κB信号通路